[發(fā)明專利]一種蛋白芯片穩(wěn)定劑及其制備方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710646044.5
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107449918A
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發(fā)明（設計）人: 李逢輝;嚴巧
• 申請（專利權）人: 中山和芯生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟

技術領域

本發(fā)明屬于生物制劑技術領域，涉及一種蛋白芯片穩(wěn)定劑及其制備方法和應用。

背景技術

生物芯片技術是20世紀末期產生的高通量平行檢測技術，它一經產生就顯示了極大的優(yōu)勢。而蛋白質微陣列近年來也發(fā)展迅速，已經應用于TORCH感染病原體和過敏原的檢測。目前有研究采用芯片的方法對15種自身抗體進行檢測，發(fā)現蛋白芯片的檢測靈敏度和特異度均和ELISA實驗相當，也有研究用芯片對18種抗原的稀釋血清檢測到自身抗體，特異度和靈敏度也很高，而且可以達到40fg的檢測下限。但是市場上的蛋白芯片穩(wěn)定性差，保質期短，制作工藝繁瑣并且成本高。

蛋白一般都是很高濃度在-80℃以液態(tài)形式保存一年甚至更長時間，但是商品化特別是用于醫(yī)院的試劑盒一般都要求蛋白以固相形式在4℃或者室溫25℃保存。并且為了減少誤差，方便檢測人員，一般都會以蛋白芯片的形式供應，但是這種蛋白芯片的蛋白是以固相形式附著于芯片上，而且蛋白濃度較低，穩(wěn)定性差，保存期短。目前市場有通過甘油封閉蛋白芯片來延長蛋白芯片保存期，但結果并不理想。為了適應市場的需要，使試劑盒中在保存期內蛋白芯片的蛋白免疫活性不發(fā)生變化，故發(fā)明配方簡單，價格低廉，適用范圍廣泛，不存在安全性隱患、具有良好的穩(wěn)定效果的蛋白芯片穩(wěn)定保存配方。

發(fā)明內容

針對現有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種蛋白芯片穩(wěn)定劑及其制備方法和應用。

為達此目的，本發(fā)明采用以下技術方案：

一方面，本發(fā)明提供一種蛋白芯片穩(wěn)定劑，所述蛋白芯片穩(wěn)定劑為在PBS緩沖體系中包括蔗糖、牛血清白蛋白、Tween-20、海藻糖和生物防腐劑Proclin300。

在本發(fā)明中，利用蔗糖、牛血清白蛋白、Tween-20、海藻糖和生物防腐劑Proclin 300組成PBS緩沖體系的生物制品穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑可以提高蛋白芯片的穩(wěn)定性，可以更好地延長蛋白芯片的保存期，又能夠節(jié)約成本，并且安全有效，不含有其他化學類制品，不會對生物制品后續(xù)應用產生不利的影響。

優(yōu)選地，在所述蛋白芯片穩(wěn)定劑中，所述蔗糖的質量百分含量為1-6％，例如1％、1.3％、1.6％、2.1％、2.7％、3.4％、3.7％、4％、4.5％、5％、5.4％或6％，優(yōu)選2-5％，進一步優(yōu)選4％。

在本發(fā)明中，蔗糖屬于非還原性二糖，自身的化學及生物性質非常穩(wěn)定。目前，蔗糖在生物技術領域的主要應用集中于蛋白等生物活性物質的保護劑方面。糖類作為保護劑，其保護作用與它們的化學結構有密切關系。它們通常具有5個以上的羥基，可以與蛋白質形成氫鍵以取代水，保證了蛋白質的穩(wěn)定性；在溶液中它們易結合水分子，發(fā)生水合作用，減少了游離水的含量并增加了溶液的粘性，從而減緩晶核的生長過程，使形成的冰晶較細小，以達到保護的目的。

優(yōu)選地，在所述蛋白芯片穩(wěn)定劑中，所述牛血清白蛋白(BSA)的質量百分含量為0.5-3％，例如0.5％、0.7％、0.9％、1％、1.2％、1.5％、1.8％、2％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％或3％，優(yōu)選1-1.5％，進一步優(yōu)選1％。牛血清白蛋白量過多(>5％)，會影響背景(空白)信號，使背景信號增高，影響測定準確性，如果牛血清白蛋白量過少，則起不到保護作用。

在本發(fā)明中，牛血清蛋白作為穩(wěn)定劑的另一種配方，同樣具有提高穩(wěn)定性的作用。蛋白質在高濃度下保存時一般不易降解，理想的濃度為1mg/ml或更高。因此在抗體溶液中加入BSA作為穩(wěn)定劑，以用來提高抗原抗體的穩(wěn)定性，特別是低濃度的抗原抗體。

優(yōu)選地，在所述蛋白芯片穩(wěn)定劑中，所述Tween-20(吐溫-20)的質量百分比含量為0.02-0.1％，例如0.02％、0.04％、0.05％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％，優(yōu)選0.04-0.08％，進一步優(yōu)選0.05％。

在本發(fā)明中，吐溫-20作為一種非離子表面活性劑，具有乳化、擴散、增溶、穩(wěn)定等作用。

優(yōu)選地，在所述含蛋白芯片穩(wěn)定劑中，所述海藻糖的質量百分比含量為2-8％，例如2％、2.7％、3％、3.8％、4.5％、5％、5.6％、6.3％、6.8％、7.4％、或8％，優(yōu)選3-5％，進一步優(yōu)選5％。

在本發(fā)明中，海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α,α,1,1-糖苷鍵構成的非還原性二糖，自身的化學及生物性質非常穩(wěn)定。并且含有海藻糖的封閉液對預包被板條抗原、抗體以及酶標記抗體穩(wěn)定性有非常好的保護作用。另外海藻糖在對抗高溫影響蛋白活性方面具有明顯的效果。