[發明專利]能敲低內源性PD-1表達的CIK及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710645459.0
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107312800B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 袁紹鵬;占順利;高磊
• 申請（專利權）人: 北京舜雷科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;張立娜

1.一種制備能敲低內源性PD-1表達的CIK細胞制劑的方法，包括如下步驟：

(A)利用細胞因子體外誘導PBMC分化為CIK；

(B)向步驟(A)所得CIK中轉入能敲低內源性PD-1表達的載體，培養后收獲細胞，從而制得所述能敲低內源性PD-1表達的CIK細胞制劑；

所述能敲低內源性PD-1表達的載體為慢病毒載體；

所述能敲低內源性PD-1表達的載體上含有13個串聯的靶向PD-1的miRNA的編碼基因；所述13個串聯的靶向PD-1的miRNA的編碼基因分別如下：

(1)miRNA-PD1-244：核苷酸序列如序列表中序列1的第2391-2449位所示；

(2)miRNA-PD1-373：核苷酸序列如序列表中序列1的第2529-2587位所示；

(3)miRNA-PD1-716：核苷酸序列如序列表中序列1的第2667-2725位所示；

(4)miRNA-PD1-791：核苷酸序列如序列表中序列1的第2805-2863位所示；

(5)miRNA-PD1-801：核苷酸序列如序列表中序列1的第2943-3001位所示；

(6)miRNA-PD1-811：核苷酸序列如序列表中序列1的第3081-3039位所示；

(7)miRNA-PD1-818：核苷酸序列如序列表中序列1的第3219-3277位所示；

(8)miRNA-PD1-904：核苷酸序列如序列表中序列1的第3357-3415位所示；

(9)miRNA-PD1-988：核苷酸序列如序列表中序列1的第3495-3553位所示；

(10)miRNA-PD1-1466：核苷酸序列如序列表中序列1的第3633-3691位所示；

(11)miRNA-PD1-1483：核苷酸序列如序列表中序列1的第3771-3829位所示；

(12)miRNA-PD1-1697：核苷酸序列如序列表中序列1的第3909-3967位所示；

(13)miRNA-PD1-1960：核苷酸序列如序列表中序列1的第4047-4105位所示；

所述能敲低內源性PD-1表達的載體的序列為序列表中序列1或序列2所示。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(A)中，所述細胞因子為CD3mAb、CD28mAb、IFN-γ和IL-2。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(B)中，所述培養的時間為自轉入所述能敲低內源性PD-1表達的載體后培養12天。

4.利用權利要求1-3中任一所述方法制備得到的能敲低內源性PD-1表達的CIK細胞制劑。

5.權利要求4所述CIK細胞制劑在如下任一中的應用：

(1)制備治療腫瘤的產品；

(2)制備用于殺傷腫瘤細胞的產品。

6.能敲低內源性PD-1表達的載體，其特征在于：所述能敲低內源性PD-1表達的載體的序列為序列表中序列1或序列2所示。

7.權利要求6所述的載體在制備權利要求4所述CIK細胞制劑中的應用。