[發明專利]一種牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體及制備方法

有效

• 申請號: 201710644462.0
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107266573B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 朱芷葳;李鵬飛;謝建山
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/06
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 俞曉明

本發明屬于基因工程技術領域，具體公開了一種牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體及制備方法，所述多克隆抗體以人工合成多肽為抗原，采用動物免疫方法制備而成；所述人工合成多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明制備的多克隆抗體能夠與牛跨膜附睪蛋白1的抗原發生作用，為牛跨膜附睪蛋白1的表達研究工作奠定基礎。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體及制備方法。

背景技術

到目前為止僅有報道稱跨膜附睪蛋白1(Transmembrane epididymal protein 1,TEDDM1)在附睪中表達，研究最多的是人附睪蛋白4(HE4)，HE4是一種新的腫瘤標志物，其發病率位居三大婦科惡性腫瘤的第三位，研究其生物功能，對于婦科惡性腫瘤的治療具有重要臨床意義。

我們首次研究發現TEDDM1在牛卵巢中也有表達，我們研究發現TEDDM1是G蛋白偶聯受體，通過在牛卵巢的顆粒細胞中擴增獲得TEDDM1全長CDS序列，分析其結構發現具有G蛋白偶聯受體的結構，有7個跨膜螺旋結構，3個胞外環，3個胞內環，1個C端，1個N端。為了進一步研究其在牛卵泡發育過程中在信號轉導和激素調節過程中發揮的作用，需進行TEDDM1的表達研究。但目前國內市場并無TEDDM1的多克隆抗體銷售，限制了TEDDM1的表達研究工作。

發明內容

本發明提供的一種牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體及制備方法，該多克隆抗體能夠與TEDDM1的抗原發生作用，為TEDDM1的表達研究工作奠定基礎。

本發明提供的目的是一種牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體的制備方法，所述多克隆抗體以人工合成多肽為抗原，采用動物免疫方法制備而成；所述人工合成多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

優選的，上述牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體的制備方法，具體過程如下：

以2.5kg體重的新西蘭大白兔為對象，首免每只加入250μg人工合成多肽與250μg弗氏完全佐劑的混合物，頸部皮下多點注射；三周后二次免疫，每只加入250μg人工合成多肽與250μg弗氏完全佐劑的混合物，頸部皮下多點注射；兩周后三次免疫，同樣加入250μg人工合成多肽與250μg弗氏完全佐劑的混合物，頸部皮下多點注射；第三次免疫后14d，頸動脈采血，制備血清，得到兔多抗血清，所述兔多抗血清即為牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體。

本發明還提供了一種根據上述方法制備的多克隆抗體。

與現有技術相比，本發明提供的一種牛跨膜附睪蛋白1的多克隆抗體及制備方法，具有以下有益效果：

我們首次研究發現牛跨膜附睪蛋白1(TEDDM1)在牛卵巢中也有表達，TEDDM1是G蛋白偶聯受體，通過在牛卵巢的顆粒細胞中擴增獲得TEDDM1全長CDS序列，分析其結構發現具有G蛋白偶聯受體的結構，有7個跨膜螺旋結構，3個胞外環，3個胞內環，1個C端，1個N端。本發明制備的多克隆抗體能夠與牛跨膜附睪蛋白1的抗原發生作用，為牛跨膜附睪蛋白1的表達研究工作奠定基礎。

附圖說明

圖1為TEDDM1和β-actin蛋白在牛第二大卵泡和最大卵泡顆粒細胞中Westernblotting結果圖；

其中，ODF1泳道均是最大卵泡，ODF2泳道均是第二大卵泡；

圖2為牛同一卵泡波內第二大卵泡和最大卵泡顆粒細胞中TEDDM1蛋白表達量定量分析；

其中，ODF1是最大卵泡，ODF2是第二大卵泡；

圖3為TEDDM1在牛同一卵泡波內的免疫組化定位分析結果(放大400倍)；

其中，圖3A、圖3B是最大卵泡；圖3C、圖3D是第二大卵泡；圖3中GC為顆粒細胞層；TC為膜細胞層。