[發(fā)明專利]用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710641207.0
• 申請(qǐng)日: 2017-07-31
• 公開（公告）號(hào): CN107290527A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 眭濤;戈應(yīng)濱;曹曉建;唐健;葛大偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 南京先科專利代理事務(wù)所(普通合伙)32285
• 代理人: 繆友菊

1.一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條，其特征在于，所述診斷試紙條包括設(shè)在硬質(zhì)塑料底板(7)上依次相連的吸水濾紙(1)、檢測(cè)墊(2)、質(zhì)控區(qū)(5)、檢測(cè)區(qū)(6)、膠體金墊(3)以及樣品墊(4)，所述檢測(cè)墊(2)上的質(zhì)控區(qū)(5)上固定有兔抗鼠IgG，檢測(cè)墊(2)上的檢測(cè)區(qū)(6)固定有抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條，其特征在于，所述抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體為小鼠抗乙酰膽堿酯酶抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條，其特征在于，所述膠體金墊(3)噴涂有膠體金標(biāo)記的抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條，其特征在于，所述膠體金標(biāo)記的抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體的膠體金直徑為20nm～100nm、抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體濃度為45μg～100μg/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條，其特征在于，所述膠體金標(biāo)記的抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體的膠體金直徑為40nm～100nm、抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體濃度為64μg～100μg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條，其特征在于，所述膠體金標(biāo)記的抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體是通過將純化后的乙酰膽堿酯酶單克隆抗體與大鼠腦組織進(jìn)行雜交，進(jìn)而獲取特異性神經(jīng)源性的乙酰膽堿酯酶單克隆抗體作為膠體金標(biāo)記的備選；然后將獲取的單克隆抗體分別進(jìn)行HRP標(biāo)記，進(jìn)行兩兩組合配對(duì)檢測(cè)，確定可夾心檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)乙酰膽堿酯酶的抗體對(duì)作為配對(duì)抗體，即得膠體金標(biāo)記的抗乙酰膽堿酯酶單克隆抗體。

7.權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶的膠體金層析快速診斷試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)在硬質(zhì)塑料底板(7)自上而下依次黏貼吸水濾紙(1)、硝酸纖維素膜的檢測(cè)墊(2)，膠體金墊(3)和樣品墊(4)，真空干燥狀態(tài)下保存，備用；

2)按照試紙條組裝步驟，分別將抗乙酰膽堿單克隆抗體標(biāo)記不同直徑的膠體金制成膠體金墊，能配對(duì)的抗乙酰膽堿單克隆抗體噴點(diǎn)到檢測(cè)墊的檢測(cè)區(qū)(6)，將兔抗鼠IgG噴點(diǎn)到檢測(cè)墊的質(zhì)控區(qū)(5)；

3)將膠體金墊(3)插入樣品墊(4)和檢測(cè)墊(2)之間，將標(biāo)準(zhǔn)乙酰膽堿酯酶的PBST溶液滴涂到樣品墊(4)上，跑樣，根據(jù)檢測(cè)區(qū)域現(xiàn)象篩選出可用于檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)乙酰膽堿酯酶的夾心式單克隆抗體組合。