[發(fā)明專利]一種包含細(xì)胞靶向抗體及Poly(I：C)的化合物及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710639942.8
• 申請(qǐng)日: 2017-07-31
• 公開（公告）號(hào): CN107693789B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳珺;鄒詩(shī);黃順梅;杜艷芹;馬賽厄斯·埃普爾;維多利亞·索科洛娃
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K39/395
• 分類號(hào): A61K39/395;A61K47/58;A61K47/69;A61K9/51;A61K31/713;A61P31/12;A61P29/00;A61P35/00
• 代理公司: 武漢河山金堂專利事務(wù)所(普通合伙) 42212
• 代理人: 胡清堂

本發(fā)明提供了一種包含細(xì)胞靶向抗體及Poly(I:C)的化合物，所述化合物以磷酸鈣納米顆粒為內(nèi)核，內(nèi)核表面接枝有PEI，內(nèi)核表面吸附載有Poly(I:C)，內(nèi)核外部為二氧化硅外殼，所述二氧化硅外殼通過環(huán)己烷?1?羧酸?3?磺基琥珀酰亞胺酯連接四種不同的細(xì)胞靶向抗體。進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法以及醫(yī)藥用途。本發(fā)明可有效實(shí)現(xiàn)poly(I:C)靶向到達(dá)肝內(nèi)細(xì)胞，從而使poly(I:C)與TLR3結(jié)合，通過激活不同免疫細(xì)胞TLR3介導(dǎo)的信號(hào)通路，增強(qiáng)干擾素和促炎因子的產(chǎn)生，起到抗HBV病毒的的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種包含細(xì)胞靶向抗體及Poly(I:C)的化合物CaP/PEI/poly(I:C)/SiO₂-S-Ab及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

在多種納米顆粒中，磷酸鈣納米顆粒具有高生物相容性、高生物降解性、體積小以及高親和力，可與一些核酸共價(jià)功能化等特性，因其有可觀的應(yīng)用前景。該納米顆粒已被用于各種領(lǐng)域,如轉(zhuǎn)染、基因沉默、藥物傳輸、光動(dòng)力治療等。一些大分子物質(zhì)常常無(wú)法穿透細(xì)胞膜,因此,一個(gè)有效的載體如納米顆粒是必需的。

磷酸鈣納米顆粒的大小約100納米很容易被細(xì)胞攝取，隨后溶解在溶酶體中。多項(xiàng)研究證實(shí)多殼包裹的磷酸鈣納米顆粒可在免疫學(xué)中用途廣泛,例如用于預(yù)防性和治療性免疫和特定的B細(xì)胞活化。

據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染過乙型肝炎病毒(HBV)，其中約2億4千萬(wàn)人為慢性HBV感染者，每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞肝癌。慢性乙型肝炎是我國(guó)現(xiàn)階段最為突出的公共衛(wèi)生問題之一。目前，慢性乙肝尚缺乏有效的治療手段，干擾素治療僅能抑制20-40％慢性乙肝患者病毒復(fù)制，核苷類似物的藥效也因病毒的耐受性突變而大大降低。近來(lái)，越來(lái)越多的研究表明，天然免疫識(shí)別受體Toll樣受體(TLR)的激動(dòng)劑作為免疫調(diào)節(jié)劑或免疫佐劑，有望成為治療病毒感染、炎癥性疾病和腫瘤的新型藥物。

天然免疫針對(duì)的主要靶分子稱為病原相關(guān)分子模式(PAMP)，相對(duì)應(yīng)的識(shí)別受體稱為模式識(shí)別受體(PRR)。PAMP主要指病原體細(xì)胞表面的分子或核酸成分，它們?cè)谶M(jìn)化中趨于保守，是病原體生存所必須得。來(lái)源于病原體的核酸，包括單鏈和雙鏈RNA，是PAMP的其中一大類。TLR是PRR中的一大家族，TLR3位于細(xì)胞內(nèi)，能夠識(shí)別病毒的雙鏈RNA。人工合成的雙鏈RNA類似物聚肌胞胞苷酸(poly(I:C))，為TLR3的配體，能夠被TLR3識(shí)別并激活TLR3，另外poly(I:C)還能被黑色素瘤分化相關(guān)基因5(MDA-5)所識(shí)別。

TLR3在胞內(nèi)識(shí)別poly(I:C)并被其激活后，能夠募集下游的銜接蛋白MyD88和TRIF，TLR3可通過MyD88依賴途徑誘導(dǎo)炎癥性細(xì)胞因子如IL-1、TNF-α、IL-6和IL-12的表達(dá)，參與非特異性抗病毒反應(yīng)，同時(shí)通過MyD88非依賴途徑誘導(dǎo)共刺激分子CD80和CD86以及IFN-β、IP-10等抗病毒性細(xì)胞因子的表達(dá)，參與誘導(dǎo)DC的分化成熟以及抗病毒免疫反應(yīng)。胞質(zhì)的MDA-5可在線粒體外模被線粒體抗病毒信號(hào)蛋白(MAVS)所招募。MDA-5雖然與TLR3利用的是不同的銜接蛋白，但下游的信號(hào)通路是相同的，都能激活一系列的轉(zhuǎn)錄因子，包括IRF3,IRF7和NF-κB，誘導(dǎo)抗炎或促炎因子(IL-6,IL-10),I型干擾素(IFN-α/β)以及共刺激分子的表達(dá)。

相關(guān)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了poly(I:C)在體外刺激肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞(肝細(xì)胞)及肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞(kupffer細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞)能產(chǎn)生IFN-β并抑制HBV的復(fù)制。另外，用poly(I:C)高壓水注射治療HBV感染的小鼠，結(jié)果表明通過poly(I:C)治療能夠清除HBV病毒，其清除HBV的作用有依于干擾素的產(chǎn)生，且poly(I:C)的抗病毒作用必須通過高壓水注射的方式激活肝內(nèi)的TLR3。在小鼠模型中可以通過高壓水注射的方式激活肝內(nèi)的TLR3，但這一方法不能用于人類，目前暫時(shí)無(wú)法有效的將poly(I:C)導(dǎo)入到患者的肝內(nèi)。因此急需一種有效載體，使得poly(I:C)能夠通過靜脈注射的方式靶向激活肝內(nèi)的TLR3。

發(fā)明內(nèi)容