[發(fā)明專利]抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑的制備方法及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710636653.2
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107441489B
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設計）人: 劉磊;張杰;馮永海;陳清玉;董明東
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: A61K47/62
• 分類號: A61K47/62;A61K41/00;A61K38/08;A61P31/04;B22F9/24;B22F1/00;B82Y40/00;B82Y30/00
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1.一種抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑的制備方法，其特征在于按照以下步驟進行：

步驟1、制備金種Au seeds：首先將氯金酸HAuCl₄溶液加入到十六烷基三甲基溴化銨CTAB溶液中，攪拌均勻，然后滴加冰水配置的硼氫化鈉NaBH₄溶液，輕晃混勻，放置于30℃水浴保溫3h以上，得到金種；

步驟2、制備金納米棒AuNRs：取步驟1中金種溶液，加入到含有十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）溶液，氯金酸HAuCl₄溶液，硝酸銀AgNO₃溶液和抗壞血酸AA溶液的生長液中，攪拌均勻，放置于30℃水浴中反應3h以上，得到金納米棒溶液；金納米棒使用前在12000rpm的轉(zhuǎn)速下離心10 min，離心兩次提純；

步驟3、制備抗菌多肽Antimicrobial Peptides，AMPs溶液：將抗菌肽粉末溶于六氟異丙醇溶液中，室溫搖晃溶解過夜，得到六氟異丙醇分散的多肽溶液；取一定體積的六氟異丙醇分散的多肽溶液于離心管中，用封口膜封住離心管的口，并用針頭在封口膜上扎幾個小孔，隨后放置于真空干燥箱中干燥，得到一定量的多肽粉末；向干燥后的含有多肽粉末的離心管中加入0.1mL去離子水，超聲3秒，振蕩3秒，并重復3次，得到抗菌肽水溶液；

步驟4、制備抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱劑Au@AMPs：將步驟3中所得到的抗菌肽水溶液加到一定量的AuNRs溶液中，輕輕振蕩30s，放置于30℃水浴中反應3h以上，使多肽所帶的巰基與金納米棒通過Au - S鍵結合，得到Au@AMPs。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑的制備方法，其特征在于步驟1中，HAuCl₄溶液的濃度為0.01mol/L，CTAB溶液濃度為0.1mol/L，NaBH₄溶液的濃度為0.01mol/L；HAuCl₄溶液、CTAB溶液和NaBH₄溶液的體積比為1：30：2.4。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑的制備方法，其特征在于步驟2中，CTAB溶液濃度為0.1mol/L，HAuCl₄溶液的濃度為0.01mol/L，AgNO₃溶液的濃度為0.01mol/L，AA溶液的濃度為0.1mol/L；CTAB溶液、HAuCl₄溶液、AgNO₃、AA溶液和金種溶液的體積比為475：20：3：3.2：1。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑的制備方法，其特征在于步驟3中，抗菌肽粉末與六氟異丙醇的比值為1mg：1mL；所用抗菌肽的氨基酸序列為RIWVIERRC或CRIWVIERRC中的一種。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑的制備方法，其特征在于步驟3中，所取用的六氟異丙醇分散的多肽溶液的體積為0.012 - 0.06mL，及最終的抗菌肽溶液濃度為0.168 - 0.84mM。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑的制備方法，其特征在于步驟4中，所用的AuNRs溶液的體積為1mL，即最終抗菌肽水溶液與AuNRs溶液的體積比為1：10。

7.根據(jù)權利要求1-6任一所述的一種抗菌肽修飾金納米棒的復合光熱抗菌劑制備方法所得到的 復合光熱抗菌劑的應用，用于光熱抗菌：按照以下步驟進行：

將體積比為1:4的細菌溶液和Au@AMPs溶液混合，靜置0.5h；在一定功率的近紅外光照射下照射后，用磷酸鹽緩沖液稀釋10000倍，取100 μL稀釋后的懸浮液涂到Luria Bertani固體培養(yǎng)基上，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，計算菌落數(shù)，以此計算殺菌率。

8.根據(jù)權利要求7所述的的應用，其特征在于所用的細菌為革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌S.aureus，ATCC 25923。

9.根據(jù)權利要求7所述的的應用，其特征在于所用近紅外光功率為0.1 - 1W，照射時間為5 - 15min。