[發明專利]一種血管內皮生長因子生物學活性的檢測方法及應用有效
| 申請號： | 201710632748.7 | 申請日： | 2017-07-28 |
| 公開（公告）號： | CN107328943B | 公開（公告）日： | 2019-04-16 |
| 發明（設計）人： | 張妍;孫菁;相鳳陽;程欣;張貴亞 | 申請（專利權）人： | 東曜藥業有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/573;G01N33/532;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 215000 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 血管 內皮 生長因子 生物學 活性 檢測 方法 應用 | ||
1.一種血管內皮生長因子生物學活性的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)向收集的人臍靜脈血管內皮細胞中加入臺盼藍混勻后進行計數，根據計數的結果調整細胞濃度至(5-8)×104/mL；
(2)將調整后的細胞在CO2培養箱中培養5-7h；
(3)將內皮生長因子作濃度梯度稀釋，所述稀釋濃度從500ng/ml至1ng/ml選取9個濃度，向步驟(2)中培養后的細胞中加入各梯度稀釋的血管內皮生長因子溶液，混勻后在CO2培養箱中培養88-92h；
(4)向步驟(3)培養后的細胞和血管內皮生長因子的混合液中加入阿爾瑪藍顯色液，混勻后在CO2培養箱中培養4-6h；
(5)將步驟(4)培養后的樣品進行熒光強度的檢測。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)所述臺盼藍反應的質量濃度為0.1-3％。
3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)所述臺盼藍反應的質量濃度為0.4％。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述培養的溫度為35-40℃。
5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述培養的溫度為37℃。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述培養的CO2濃度為3-8％。
7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述培養的CO2濃度為5％。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)所述培養的溫度為35-40℃。
9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)所述培養的溫度為37℃。
10.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)所述培養的CO2濃度為3-8％。
11.根據權利要求10所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)所述培養的CO2濃度為5％。
12.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述阿爾瑪藍與所述混合液的體積比為1:(2-8)。
13.根據權利要求12所述的檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述阿爾瑪藍與所述混合液的體積比為1:4。
14.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述培養的溫度為35-40℃。
15.根據權利要求14所述的檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述培養的溫度為37℃。
16.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述培養的CO2濃度為3-8％。
17.根據權利要求16所述的檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述培養的CO2濃度為5％。
18.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(5)所述檢測的條件為在激發光530nm和發射光590nm下進行。
19.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，在步驟(1)之前還包括細胞培養的步驟。
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