[發明專利]一種酮康唑半抗原、人工抗原及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201710631811.5
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN109305963A
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發明（設計）人: 聶靖東;秦譽;吳雨洋
• 申請（專利權）人: 北京維德維康生物技術有限公司
• 主分類號: C07D405/06
• 分類號: C07D405/06;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/47;C07K16/44;G01N33/53
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1.一種酮康唑半抗原，其結構如式I所示：

式I。

2.制備權利要求1所述化合物的方法，包括步驟為：

乙酰酮康唑溶解于吡啶溶液，加入琥珀酸酐反應，獲得反應液；所述乙酰酮康唑、吡啶、琥珀酸酐的配比為1000mg：25ml：411.52mg，所述反應溫度為20-24℃，所述反應時間為5h；

反應液在冰水中析出白色固體，過濾后的濾餅經25ml水洗、鼓風干燥得到式I所述的酮康唑半抗原1144.25mg；所述鼓風干燥的溫度為50℃，時間為5-6小時。

3.酮康唑抗原，為將權利要求1所述化合物與載體蛋白偶聯所得的抗原。

4.根據權利要求3所述的酮康唑抗原，其特征在于：所述載體蛋白可以是牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血藍蛋白、鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白或兔血清蛋白。

5.權利要求3或4所述的酮康唑抗原的制備方法，包括如下步驟：將權利要求1所述化合物與載體蛋白通過酰胺鍵偶聯，獲得所述酮康唑抗原；權利要求1所述化合物與所述載體蛋白偶聯的摩爾比為19.5：1。

6.根據權利要求5所述的酮康唑抗原的制備方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

（1）將所述酮康唑半抗原（式I）溶解于二甲基甲酰胺（DMF）中，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS），20-25℃磁力攪拌反應2-3h，得到溶液I；

其中，所述酮康唑半抗原（式I）、所述二甲基甲酰胺（DMF）、所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）、所述N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）的配比為26.39mg：1.5mL：21.5mg：13mg；

（2）將所述載體蛋白置于0.1M碳酸氫鈉緩沖液中，200rpm攪拌10min，充分溶解，得到溶液II；所述載體蛋白與所述0.1M碳酸氫鈉緩沖液的配比為33.6-50mg：3.5mL；

（3）將所述溶液I和所述溶液II混合，具體為在0-4℃條件下，1000rpm攪拌下，將溶液I逐滴加入到所述溶液II中，500rpm攪拌反應24h，得到溶液III；

（4）用磷酸鹽緩沖液（0.01M PBS，pH7.2），于4℃對所述溶液III攪拌透析3天，得到所述酮康唑抗原。

7.權利要求1所述化合物或權利要求3所述酮康唑抗原的應用，其特征在于定性或定量檢測酮康唑；制備酮康唑抗體。

8.利用權利要求3所述酮康唑抗原制備的抗體。

9.根據權利要求7所述的酮康唑抗原的應用，其特征在于可以為制備酶聯免疫試劑盒和膠體金檢測卡。

10.根據權利要求7或9所述的酮康唑抗原的應用，其特征在于檢測樣本可以為動物肉、組織及雞蛋，所述檢測上述樣本中酮康唑的檢測限為1μg/kg。