[發明專利]一種脂肪干細胞培養基及其應用

有效

• 申請號: 201710631364.3
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN107345216B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 肖佳;朱江;李綿歡;劉映霞;呂翼;何留民
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61P1/16
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

本發明提供了一種脂肪干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，添加劑為溶血磷脂酸(LPA)或1?磷酸鞘氨醇(S1P)中的一種或兩種。本發明針對現有脂肪干細胞體外培養方法中使用的培養基進行優化，與現有產品相比，添加了特殊的LPA及S1P成分。體外實驗及體內試驗表明，在脂肪干細胞的培養過程中單獨或同時添加LPA或S1P均能夠提高干細胞抵抗逆境生長壓力的能力，同時能夠保證脂肪干細胞的持續增值，并維持脂肪干細胞的表型和功能的穩定。本發明在脂肪干細胞體外培養的增值效率、表型穩定性及安全性方面達到了現有培養體系水平，同時由于極大提高了移植后治療急性肝損傷和酒精肝的效率，使所培養的脂肪干細胞更適用于在多種疾病的干細胞移植臨床治療中使用。

技術領域

本發明涉及干細胞培養技術領域，更具體地，涉及一種脂肪干細胞培養基及其應用。

背景技術

藥物、毒素或酒精引起的急性或慢性肝損傷是世界范圍內嚴重的臨床問題，例如，每年約有10%的急性肝炎病例為藥物性肝損傷。在美國，據報道有1510萬名成年人患有酒精濫用，其中包括980萬名男性和530萬名女性。據估計每年有88000人死于酒精引起的疾病。這些藥物/毒素或酒精引起的肝損傷可能進展為肝功能衰竭，需要及時的肝移植。

由于再生醫學的快速發展，干細胞移植成為一種很有前途的治療藥物、毒素、酒精引起的嚴重肝損害的有效策略，以解決肝移植過程中的諸多問題，如供體器官不足，排斥反應和感染等。現今臨床上干細胞移植主要應用于代謝性肝病，也用于急性肝功能衰竭和終末期肝病。

脂肪干細胞是由中胚層發育而來的多能干細胞，能夠被誘導分化為多種細胞，包括同樣中胚層來源的成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞。還可以跨胚層分化為內胚層來源的肝細胞、胰島β樣細胞，外胚層來源的神經細胞、心肌細胞、表皮細胞等。與其他間充質干細胞相比，脂肪干細胞來源豐富，取材簡便，是優秀的組織工程與細胞治療的種子細胞。研究表明脂肪干細胞在肝組織損傷修復過程中能夠起到治療性作用。

然而在臨床實踐過程中，干細胞移植療法仍需要克服幾個主要問題，如移植治療所需干細胞數量相對較大，且對干細胞移植后的融合率及細胞功能的保持要求頗高。而移植環境中的炎癥和氧化損傷等因素使得移植后脂肪干細胞死亡率高、不容易成活，移植的細胞不能很好地融入宿主組織，或者在成功融合后短時間內消失。研究表明，在干細胞的體外培養及增值過程中如能增強細胞抵抗氧化應激和炎癥的能力，則在如急性肝衰竭和心肌梗死等多種疾病模型的移植治療過程中療效顯著提高。

現有移植治療用干細胞培養過程中為增強細胞增殖能力，多選擇補充不同種類和濃度的生長因子（如HGF、EGF、PDGF、VEGF、TGF-β等）或其他信號通路激活、抑制分子，從而加快脂肪干細胞的增殖及移植后存活能力。而緩解炎癥及氧化壓力方面則多使用抗氧化劑。然而，這些生長因子或小分子成分的加入，一定程度上將影響移植治療用干細胞的表型和移植后的穩定性，且未能顯著增加移植后的干細胞抗逆境生長環境的能力及移植治療效果，較難直接應用于臨床治療。因此，如何建立穩定高效的擴增體系，保持干細胞的生理特性和移植后穩定的修復作用是臨床用干細胞培養中亟待解決的問題。

發明內容

本發明根據現有技術中的不足，提供了一種脂肪干細胞培養基。

本發明另外提供了上述脂肪干細胞培養基在用于移植治療急性肝損傷和/或酒精肝的脂肪干細胞培養中的應用。

本發明針對現有脂肪干細胞體外培養方法中使用的培養基進行了優化，添加了特有的LPA及S1P成分，在保證脂肪干細胞體外生長、維持了脂肪干細胞的表型和功能的穩定的同時，顯著增加了干細胞體外培養抗逆境的能力，以及移植后治療急性肝損傷和酒精肝的效率，使所培養的脂肪干細胞更適用于在多種疾病的干細胞移植臨床治療中使用。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種脂肪干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，添加劑為溶血磷脂酸或1-磷酸鞘氨醇中的一種或兩種。