[發(fā)明專利]一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710630213.6
• 申請(qǐng)日: 2017-07-28
• 公開（公告）號(hào): CN107254443B
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王一飛;陳海佳;葛嘯虎;萬麗;王小燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0793
• 分類號(hào): C12N5/0793;C12N5/0775
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎;趙青朵

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)方法。該誘導(dǎo)培養(yǎng)基由如下組分組成：1～10μg/mL人參皂苷Rb1，1～10ng/mL EGF，神經(jīng)元培養(yǎng)上清液。本發(fā)明將人參皂苷Rb1、EGF與神經(jīng)元培養(yǎng)上清液組成新型培養(yǎng)基，試驗(yàn)結(jié)果顯示該培養(yǎng)基可顯著提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)率，表明該培養(yǎng)基可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)

中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central Nervous System,CNS)主要有兩大類細(xì)胞：神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞又分為大神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞)和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)元和大神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞來源于外胚層，而大約占神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的5％～20％的小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞被認(rèn)為來源于骨髓。人們一直以來都認(rèn)為哺乳動(dòng)物的CNS是屬于不能再生類的組織，但是，這一神經(jīng)學(xué)的經(jīng)典法則正受到挑戰(zhàn)，近年的研究已經(jīng)顯示神經(jīng)祖細(xì)胞具有在CNS進(jìn)行細(xì)胞分裂的能力。雖然這些細(xì)胞的功能和壽命還有待研究，但是已有明確的證據(jù)顯示，在哺乳動(dòng)物的齒狀回和嗅球有成熟的神經(jīng)形成。近來，隨著神經(jīng)細(xì)胞群的分化研究，在脊髓區(qū)也同樣發(fā)現(xiàn)有成熟的神經(jīng)形成。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病、遺傳性疾病等是臨床上治療的難點(diǎn)。由于藥物治療僅僅是對(duì)癥治療，故神經(jīng)組織移植替代治療就成為最有發(fā)展前景的方法。神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能單位。神經(jīng)元有接受、整合和傳遞信息的功能。一般就長(zhǎng)軸突神經(jīng)元而言，樹突和胞體接受從其他神經(jīng)元傳來的信息，并進(jìn)行整合，然后通過軸突將信息傳遞給另一些神經(jīng)元或效應(yīng)器。神經(jīng)干細(xì)胞(neural stemcells,NSCs)定向分化為的神經(jīng)元在神經(jīng)發(fā)育和修復(fù)受損神經(jīng)組織中發(fā)揮重要作用。因此，尋求一種可以使NSCs定向分化為神經(jīng)元的方法是國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。但是NSCs的來源和數(shù)量有限是目前存在的主要問題。

相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal Stem Cells，BMSCs)是最具有多向分化潛能和高度自我復(fù)制能力的細(xì)胞。BMSCs不僅能分化成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌肉細(xì)胞和造血支持細(xì)胞。無論是在體外研究，還是在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，BMSCs都可以分化為CNS細(xì)胞，包括神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞。BMSCs是一群存在于骨髓中的非造血干細(xì)胞。自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，因具有沒有免疫排斥反應(yīng)，取材方便，對(duì)供體損傷小，易于分離培養(yǎng)及體外增殖能力強(qiáng)，為中樞系統(tǒng)疾病臨床治療提供了豐富的細(xì)胞資源。

目前使用的誘導(dǎo)骨髓MSCs分化成神經(jīng)元的方法為加入預(yù)誘導(dǎo)液(即DMEM培養(yǎng)基+20％胎牛血清+1mmol/Lβ-巰基乙醇)置于37℃、5％CO₂條件下培養(yǎng)24h，預(yù)誘導(dǎo)后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含10mmol/Lβ-巰基乙醇的無胎牛血清培養(yǎng)基中并置于37℃、5％CO₂，條件下培養(yǎng)5d。但該培養(yǎng)方法分化成神經(jīng)元的比例少，大部分分化成膠質(zhì)細(xì)胞。因此，需要提供一種能夠提高BMSCs分化成神經(jīng)元比例的誘導(dǎo)方法。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)方法。該培養(yǎng)基可顯著提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)率。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，由如下組分組成：

人參皂苷Rb1：1～10μg/mL；

EGF：1～10ng/mL；

神經(jīng)元培養(yǎng)上清液：補(bǔ)足。

本發(fā)明將人參皂苷Rb1、EGF與神經(jīng)元培養(yǎng)上清液組成新型培養(yǎng)基，試驗(yàn)結(jié)果顯示該培養(yǎng)基可顯著提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)率，表明該培養(yǎng)基可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化。