[發(fā)明專利]促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法

在審

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• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN107189977A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李華政;韋榮昌
• 申請（專利權(quán)）人: 李華政
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01G7/06;A01H4/00
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11369
• 代理人: 靳浩

1.一種促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、將羅漢果組培苗置于茉莉酸甲酯濃度為50～400μmol/L的第一培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到羅漢果幼苗；

步驟二、在栽培步驟一中得到的羅漢果幼苗過程中，施加茉莉酸甲酯濃度為50～400μmol/L的乙醇溶液。

2.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，步驟一中第一培養(yǎng)基還包括：MS、1～2mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的IBA、3～4g/L的瓊脂、20～40g/L的蔗糖、0.5～2g/L的活性炭。

3.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，步驟一中羅漢果組培苗的培養(yǎng)方法為：于相對濕度為60～66％，光照強(qiáng)度為1200～1500lux，光照時(shí)間為8h/d，溫度為23±2℃條件下培養(yǎng)30d。

4.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，步驟二中在羅漢果栽培過程中，在羅漢果授粉后20～30d后，每天噴灑三次茉莉酸甲酯濃度為50～400μmol/L的乙醇溶液，每株每次噴灑200～300g，連續(xù)噴灑5d。

5.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，步驟二中在栽培羅漢果過程中，在羅漢果授粉后3～5d，每隔2d施加一次營養(yǎng)液，施加3～5次，每株每次噴灑500～1000g；其中營養(yǎng)液的制備方法為：將重量份為0.1～0.5份的氯吡脲、0.1～0.2份的蕓苔素、0.1～0.5份的復(fù)硝酚鈉溶于重量份為5～10份的無水乙醇中，攪拌，溶解，然后再加入重量份為5～10份的二甲基亞砜、1～2份的2，4-二氯苯氧基乙酸、5～10份的黃腐植酸鉀、10～20份的硫酸鉀、20～50份的水?dāng)嚢杈鶆蚣吹谩?!-- SIPO -->

6.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，步驟一中在羅漢果組培苗置于第一培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)還加入保水劑，所述保水劑與第一培養(yǎng)基的質(zhì)量比為5:0.1～0.5；所述保水劑由以下重量份的原料組成：羧甲基纖維素鈉5～10份、聚丙烯酸鉀1～2份、聚乙烯醇1～2份、沸石粉0.1～0.5份、核桃殼粉0.1～0.2份、牡蠣殼粉0.1～0.5份、膨潤土1～2份、椰殼粉0.1～0.2份、柚子皮粉0.1～0.5份、硫酸鋁鉀1～2份、硫酸鋁銨0.5～1份、尿素1～2份、磷酸二氫鉀0.1～0.5份、水5～10份、丙烯酸0.1～0.5份。

7.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，步驟一中羅漢果組培苗經(jīng)過第一培養(yǎng)基培養(yǎng)之后還置于茉莉酸甲酯濃度為10～20μmol/L的第二培養(yǎng)基中培養(yǎng)培養(yǎng)5～10d；培養(yǎng)條件為：相對濕度為60～66％、光照強(qiáng)度為1500lux、光照時(shí)間為12h/d、溫度為23±2℃；其中第二培養(yǎng)基還包括：MS、1mg/L的NAA、0.5mg/L的吲哚-3-丁酸、1.5g/L的瓊脂、2g/L的蔗糖。

8.如權(quán)利要求1所述的促進(jìn)羅漢果UGT4基因表達(dá)的方法，其特征在于，步驟二中還包括在羅漢果栽培前，在待栽培土壤表面按2500～3500kg/畝施加營養(yǎng)土，并翻耕均勻；所述營養(yǎng)土的制備方法包括以下步驟：

A、取重量份為5～10份的泥炭、5～10份的膨潤土、1～2份的珍珠巖混合，向其中加入重量份為20～30份的水、3～6份的碳酸鈉、1～3份的氫氧化鉀，于溫度為40～80℃下攪拌4～8h，冷卻至室溫，然后再加入重量份為0.1～0.5份的聚合硫酸氯化鐵鋁、1～2份的聚丙酰胺，調(diào)節(jié)pH為1～2，繼續(xù)攪拌1～2h，過濾，烘干，粉碎至200～500目，得到第一混合物；

B、將重量份為0.5～2份的聚乙二醇、0.5～1份的聚乙烯醇、15～20份的水于溫度為85～100℃下攪拌溶解，得到第一混合液；

C、將第一混合物、爐渣灰、花生殼粉、木屑、腐殖土、草木灰、玉米秸稈粉、核桃殼粉、腐殖酸混合均勻，然后表面均勻噴灑第一混合液即得營養(yǎng)土；

其中，第一混合物、爐渣灰、花生殼粉、木屑、腐殖土、草木灰、玉米秸稈粉、核桃殼粉、腐殖酸、第一混合液的質(zhì)量比為15:5～10:0.1～0.5:0.5～1:2～5:1～2:0.1～0.5:0.1～0.2:1～2:0.05～0.1。