[發(fā)明專利]一種在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710629475.0
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN109306339A
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高躒;楊潔;楊懿銘;劉李棟
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市血液中心
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784
• 代理公司: 上海卓陽知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

1.一種在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，以mTOR抑制劑對純化的未成熟樹突狀細(xì)胞進(jìn)行處理。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述制備方法如下：

1)獲取純化的人未成熟樹突狀細(xì)胞；

2)將純化的人未成熟樹突狀細(xì)胞懸于完全細(xì)胞培養(yǎng)基中；

3)調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為5*10⁴/ml-5*10⁶/ml；

4)在培養(yǎng)體系中加入mTOR抑制劑；

5)孵育20分鐘-24小時；

所述步驟1中純化的人未成熟樹突狀細(xì)胞中CD1a陽性且CD83陰性細(xì)胞含量大于80％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，孵育所用的培養(yǎng)基為含10％FBS的RPMI-1640、或含1％-10％人AB血清的RPMI-1640完全細(xì)胞培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述mTOR抑制劑選自：雷帕霉素rapamycin、替西羅莫司temsirolimus、依維莫司everolimus、ridaforolimus、NVP-BEZ235、SF-1126、XL-765、PKI-587、PF-04691502、PKI-402、OSI-027、AZD-8055、PP-242、PP-30、torin-1、WYE-125132、WAY-600、WYE-687、WYE-354、KU-0063794或Palomid-529。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述mTOR抑制劑為雷帕霉素rapamycin、替西羅莫司temsirolimus或依維莫司everolimus。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述步驟4中mTOR抑制劑終濃度為0.1μM-10μM。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，制備得到的耐受性樹突狀細(xì)胞凋亡率小于35％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述在炎性環(huán)境下保持穩(wěn)定的耐受性樹突狀細(xì)胞的制備方法，其特征在于，制備得到的耐受性樹突狀細(xì)胞在炎性刺激下抑制CD83、CD80及CD86的表達(dá)。

9.權(quán)利要求1-8任一所述制備方法制備得到的耐受性樹突狀細(xì)胞。

10.權(quán)利要求9所述的耐受性樹突狀細(xì)胞在制備具有免疫耐受功能的樹突狀細(xì)胞制品中的應(yīng)用，所述的樹突狀細(xì)胞制品是用于預(yù)防和/或治療自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、器官移植排斥的樹突狀細(xì)胞制品。