[發明專利]制備融合蛋白的方法

有效

• 申請號: 201710628688.1
• 申請日: 2016-08-19
• 公開（公告）號: CN107759697B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 李強;李媛麗;陳思;王著;董炤;李子瑞;馬心魯;楊璐;高永娟;鄭云程;孫乃超
• 申請（專利權）人: 安源醫藥科技（上海）有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85
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1.一種制備融合蛋白的方法，其結構通式表示為K1-L-K2，所述融合蛋白包含第一種生物活性分子K1、第二種生物活性分子K2和連接肽L，且組成所述融合蛋白的各部分自N端至C端首尾依次相連，K1選自細胞因子、生長因子、激素、酶、受體以及對于受體具有配體功能的蛋白或者多肽，K2為延長循環半衰期的血清蛋白或蛋白結構域，且選自抗體/免疫球蛋白Fc片段，所述方法包括可以使生物活性分子K1和K2通過連接肽L相連接的步驟，其特征在于，所述連接肽L由柔性肽和剛性肽組成；所述連接肽L的氨基酸序列如SEQ ID NO：2、3、5或7所示。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性分子K1選自表皮生長因子EGF及受體家族、凝血因子IIa、因子VII、因子VIII、因子IX、成纖維細胞生長因子FGF及受體家族、促卵泡激素、胰高血糖素、生長激素、胰島素樣生長因子IGF及結合蛋白家族、白細胞介素IL超家族及其受體超家族、干擾素IFN家族、甲狀旁腺激素、促甲狀腺激素、促甲狀旁腺激素、腫瘤壞死因子TNF超家族及其受體TNFRSF超家族、血管內皮生長因子VEGF及其受體家族；所述生物活性分子K2選自人抗體/免疫球蛋白Fc片段。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc片段的氨基酸序列如SEQID NO：8、9、10、11或12所示。

4.如權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(a)將編碼所述融合蛋白的第一種生物活性分子K1和第二種生物活性分子K2的DNA序列通過連接肽L的DNA序列連接組成融合基因；

(b)將步驟(a)中獲得的融合基因引入DHFR酶缺陷型CHO宿主細胞；

(c)培養步驟(b)篩選到的高產量表達宿主細胞，表達融合蛋白；

(d)收獲步驟(c)得到的發酵液，并分離純化融合蛋白。