[發(fā)明專利]由腫瘤細(xì)胞激活的診療一體化納米探針及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710618468.0
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN107441507B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李永強(qiáng);嚴(yán)榮;趙志偉
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K31/7088;A61K41/00;A61K47/54;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 楊慧林

本發(fā)明涉及一種由腫瘤細(xì)胞激活的診療一體化納米探針，包括納米金顆粒、巰基修飾的寡核苷酸結(jié)合序列以及抗生存素反義寡核苷酸，抗生存素反義寡核苷酸的一端修飾有與寡核苷酸接合序列互補(bǔ)的堿基對和二硫鍵，另一端修飾有熒光染料，其中，納米金顆粒與巰基修飾的寡核苷酸接合序列通過共價鍵耦聯(lián)，抗生存素反義寡核苷酸與巰基修飾的寡核苷酸接合序列通過堿基互補(bǔ)連接。本發(fā)明還公開了上述由腫瘤細(xì)胞激活的診療一體化納米探針在作為腫瘤細(xì)胞的診斷劑和/或治療劑中的應(yīng)用。本發(fā)明的診療一體化納米探針能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞進(jìn)行特異性熒光診斷，靶向性高，且能夠在診斷的同時實(shí)現(xiàn)光熱/基因的協(xié)同治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種由腫瘤細(xì)胞激活的診療一體化納米探針及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

惡性腫瘤目前是全世界人類的主要死亡原因之一，嚴(yán)重危害人類生命，治愈腫瘤一直是人類追求的目標(biāo)。手術(shù)切除是惡性腫瘤的一種主要治療方式，然而臨床上有很大一部分的腫瘤病人的腫瘤在進(jìn)行根治性切除手術(shù)前已出現(xiàn)了微轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致術(shù)后腫瘤的高復(fù)發(fā)及腫瘤病人的死亡。因此，為提高腫瘤的治療效率和降低其術(shù)后復(fù)發(fā)率，研究腫瘤的早期診斷與治療技術(shù)具有非常重要的意義。

目前用于腫瘤治療的方法主要有放療、化療、光療(光動力及光熱治療)、基因治療等，盡管這些方法都對腫瘤具有一定的殺傷作用，但在臨床中，單一的治療手段很難實(shí)現(xiàn)對腫瘤的完全殺滅，因此近年來基于多種策略的腫瘤協(xié)同治療方法引起了廣泛關(guān)注。但上述方法都有嚴(yán)重的副作用，會對正常組織造成不可逆轉(zhuǎn)的損害，因此如何增強(qiáng)治療的靶向性和特異性成為腫瘤協(xié)同治療中難點(diǎn)。另外，由于腫瘤浸潤的不規(guī)則特性，常常導(dǎo)致腫瘤組織和正常組織間的界限模糊，使人們很難實(shí)現(xiàn)對腫瘤的精準(zhǔn)診斷辨別。因此，為解決上述腫瘤診療中存在的問題，迫切需要發(fā)展一種針對腫瘤細(xì)胞的特異性診療一體化探針。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種由腫瘤細(xì)胞激活的診療一體化納米探針及其應(yīng)用，本發(fā)明的納米探針能夠?qū)崿F(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的特異性診斷和高效協(xié)同治療。

本發(fā)明提供了一種由腫瘤細(xì)胞激活的診療一體化納米探針，包括納米金顆粒、巰基修飾的寡核苷酸結(jié)合序列以及抗生存素反義寡核苷酸(anti-survivin)，抗生存素反義寡核苷酸的一端修飾有與寡核苷酸結(jié)合序列互補(bǔ)的堿基對和二硫鍵，另一端連接有熒光染料，其中，納米金顆粒與巰基修飾的寡核苷酸結(jié)合序列通過金硫鍵共價耦聯(lián)，抗生存素反義寡核苷酸與巰基修飾的寡核苷酸結(jié)合序列通過堿基互補(bǔ)連接。

進(jìn)一步地，納米金顆粒的等離子共振吸收峰為700-1000nm，納米金顆粒為納米金星顆粒、納米金環(huán)顆粒和納米金花顆粒中的一種或幾種。優(yōu)選的，納米金顆粒為納米金星顆粒；納米金星顆粒的星型分枝范圍為3-8個。

進(jìn)一步地，納米金顆粒的粒徑范圍為30-50nm。

進(jìn)一步地，巰基修飾的寡核苷酸結(jié)合序列的堿基長度為6-10bp。6-10bp的序列長度一方面可以滿足堿基互補(bǔ)的準(zhǔn)確性，另一方面也不會對納米顆粒的穿膜造成影響，另外其合成成本也較低。

進(jìn)一步地，巰基修飾的寡核苷酸結(jié)合序列為3’-HS-poly(A)-5’、3’-HS-poly(T)-5’、3’-HS-poly(G)-5’或3’-HS-poly(C)-5’。其3’端修飾有巰基(-SH)，poly(A)、poly(T)、poly(G)、poly(C)的序列長度為6-10bp。

進(jìn)一步地，熒光染料為異硫氰酸熒光素(FITC)、花菁染料3(Cy3)、花菁染料5(Cy5)和花菁染料5.5(Cy5.5)中的一種或幾種。

進(jìn)一步地，抗生存素反義寡核苷酸的序列如SEQ ID No.1所示。

進(jìn)一步地，上述由腫瘤細(xì)胞激活的診療一體化納米探針的制備方法包括以下步驟：