[發明專利]檢測樣品中氨基酸、有機酸或磷酸糖代謝產物的新型內標物

有效

• 申請號: 201710618104.2
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN109307728B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 儲炬;劉秀;王永紅;杭海峰;田錫煒;沈玉婷
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發明涉及檢測樣品中氨基酸、有機酸或磷酸糖代謝產物的新型內標物。本發明揭示了適用于在檢測待測樣品中氨基酸、有機酸或磷酸糖代謝產物的過程中作為內標物的新型化合物，并建立了檢測方法。本發明的內標物以及檢測方法可有效地提高發酵代謝產物的檢測精確度，并且過程簡便，成本較低。

技術領域

本發明屬于物質檢測領域，更具體地，本發明涉及檢測樣品中氨基酸、有機酸或磷酸糖代謝產物的新型內標物。

背景技術

在發酵工業中，胞內代謝物的檢測是普遍需要的。由于中間代謝物具有種類多、濃度低和周轉快等特點，氣相色譜-質譜法(GC-MS)已應用于這些物質的定性與定量分析(GUOMeng-Lei，LIU Xiao-Yun，HUANG Ming-Zhi，et al.¹³C-assisted ultra-high performanceliquid chromatography triple quadrupole mass spectrometry method for precisedetermination of intracellular metabolites in Pichia pastoris.ChineseJ.Anal.Chem.，2016，44(2):232-240)。目前胞內代謝物的檢測多采用同位素稀釋-質譜定量法(簡稱IDMS)，通過測量樣品的未標記代謝物和作為內標的全標記代謝物的比值實現定量分析(Hellerstein M K，Neese R A.Mass isotopomer distribution analysis ateight years:theoretical， analytic，and experimentalconsiderations.Am.J.Physiol.276，E1146-E1170[J]. American Journal ofPhysiology，1999，276(6Pt 1):E1146)。此方法精確性高，重現性好，但¹³C內標物獲取過程較繁瑣，菌體發酵必須使用合成培養基、以U-¹³C-Glu為底物、需將¹³C胞內代謝物提取出來且所獲得的¹³C內標物濃度未知，應用中的添加量仍需摸索等，除¹³C同位素的高價格，這一系列程序也在無形中增加了實際操作成本。

為了解決以上問題，本領域已采用代謝物內標法，即以性質相對穩定且不影響各中間物的化合物對氨基苯甲酸作為內標物，以取代¹³C同位素對代謝物進行定性或定量分析。

然而，本發明人在前期研究過程中，發現以對氨基苯甲酸作為氨基酸類發酵代謝物、有機酸類發酵代謝物、磷酸糖類發酵代謝物的內標物時，存在信號值不夠理想，作為低濃度代謝產物的內標時靈敏度不高等問題。因此，需要研究解決這類問題的方法，以在實踐中進一步地改進發酵代謝產物的檢測水平。

發明內容

本發明的目的在于提供檢測樣品中氨基酸、有機酸或磷酸糖代謝產物的新型內標物。

在本發明的第一方面，提供一種檢測待測樣品中氨基酸、有機酸或磷酸糖代謝產物的方法，所述方法包括：以GC-MS方法對待測樣品進行檢測，并且，檢測待測樣品中氨基酸時，以正亮氨酸(NLE)作為內標物；或

檢測待測樣品中有機酸時，以丙二酸(PPD)或己二酸(HEX)作為內標物；較佳地，以己二酸作為內標物；或

檢測待測樣品中磷酸糖時，以磷酸單丁酯(MBP)作為內標物。

在一個優選例中，所述的待測樣品包括(但不限于)：溶液，懸浮液。

在另一優選例中，所述的待測樣品是生物發酵液。

在本發明的另一方面，提供正亮氨酸的用途，用于在GC-MS方法檢測待測樣品時，作為氨基酸的內標物。

在本發明的另一方面，提供丙二酸或己二酸的用途，用于在GC-MS方法檢測待測樣品時，作為有機酸的內標物。