[發明專利]一種Lasiodiplodia iranensis菌及其發酵產茉莉酸的方法

有效

• 申請號: 201710616357.6
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN107227264B
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 鄭璞;陳鵬程;董文華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/40;C12P1/02;A01N37/42;A01P21/00;A01P7/04;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發明公開了一種Lasiodiplodia iranensis菌及其發酵產茉莉酸的方法，屬于生物技術領域。本發明提供一株可以產茉莉酸的菌株DWH?2，經ITS鑒定為Lasiodiplodia iranensis，該菌已于2017年5月27日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC NO：M2017288。DWH?2在固體培養基上培養4～5天，轉接發酵培養基中靜止發酵6～10天，可以產生1500mg/L以上的茉莉酸。本發明提供了一種用微生物發酵法產茉莉酸的方法，與化學合成方法相比，具有很大的優勢。

技術領域

本發明涉及一種Lasiodiplodia iranensis菌及其發酵產茉莉酸的方法，屬于生物技術領域。

背景技術

茉莉酸化學名稱3-氧-2-2′-順-戊烯基-環戊烷-1-乙酸，分子式C₁₂H₁₈O₃，分子量210.27。是一種新型的植物激素，在植物的花、莖、葉、根等組織與器官中普遍存在，在植物的生長發育過程中發揮著重要的作用。同時作為第二信號，在植物受到生物與非生物的傷害時誘導激活植物體內的防御基因，抵御外界的傷害。并且因茉莉酸及其甲酯具有清淡、幽雅的香味，所以其可作為很多香花精油主香的成分，廣泛的應用于香料業的產生中。在農業生產中，茉莉酸類物質能明顯的促進不育植株開花還可以用來提高植物的抗旱性，同時茉莉酸類物質可以誘導植物產生有毒物質、害蟲蛋白酶抑制劑等來達到抗蟲害的效果，在農業生產中可以用其來代替部分殺蟲劑。

目前茉莉酸的制備方法主要有三種，從植物中提取、化學合成及微生物發酵法。植物中茉莉酸含量在1^-9～10^-6g/g，因此，從植物中提取的量少，滿足不了當前的需求?；瘜W法根據起始原料不同，分為順-4-庚烯酸為起始原料、乙酸乙酯為起起始原料、及2-環戊烯-1-乙二醇縮酮和2-甲基-1,3-丁二烯為起始原料的方法，但這些方法的反應收率不高(30％以下)，反應條件苛刻，并且合成的茉莉酸都是外消旋物，限制了其使用的范圍。

微生物發酵法是通過真菌發酵生產茉莉酸。Aldridge等最早從真菌可可毛色二孢Lasiodiplodia theobroma培養液中分離出游離的茉莉酸(J.Chem Soc Chem Coummum.1971,13:1623),這說明某些微生物具有分泌茉莉酸的可能。美國專利US20020110881A1公開了棉色二孢(Diplodiagossypina)發酵產茉莉酸、茉莉酸甲酯及茉莉酸異構體的方法，其中， D.gossypina ATCC 10936產茉莉酸濃度可達1.2g/L。國內，韓曉敏等為檢測可可毛色二孢菌對白木香產生倍半萜的誘導作用，采用氣質聯用在其PDA培養液中檢測到茉莉酸類化合物 (中國中醫藥雜志，2014，39(2)：192-196)，但其中茉莉酸甲酯含量不高(250mg/L)，同時沒有進行相關發酵生產方面的研究。

發明內容

本發明要解決的第一個技術問題是提供一株Lasiodiplodia iranensis DWH-2，可以產生茉莉酸。本發明對變質果蔬及玉蕊、拉貢木、海桑、水黃皮、玉米、棉花等植物的腐爛部位上的微生物進行分離，篩選得到分泌茉莉酸的菌株DWH-2，經分子鑒定屬于一株L.iranensis 菌，其產量明顯高于一般野生菌株，通過優化培養基和培養條件進一步提高了產物濃度。所述L.iranensis DWH-2已于2017年5月27日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為 CCTCC NO：M2017288。

所述DWH-2的活化培養，可將菌株接于PDA平板上，放置在25～28℃的培養箱中活化 4～5天。

所述DWH-2在PDA平板上，菌落生長初期為白色，且日生長量較快，生長到第四天時平板背面開始出現綠色，生長到第六天時培養基開始變成黑色，生長到第九天時培養基完全變成黑色。在電鏡下觀察，發現該菌的菌絲體有橫隔，且為多核。