[發明專利]用于檢測玉米赤霉烯酮及其代謝產物的單抗及酶聯免疫方法與試劑盒

有效

• 申請號: 201710615989.0
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN107915774B
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 彭大鵬;袁宗輝;董國良;王玉蓮;潘源虎;陳冬梅;陶燕飛;劉振利
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C12N5/20;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/531;C12R1/91
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

本發明公開了一種能識別玉米赤霉烯酮及其代謝產物的特異性單克隆抗體，它是由雜交瘤細胞株ZEN/6C2所分泌的，所述的雜交瘤細胞株ZEN/6C2，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:C201781。本發明還公開了檢測玉米、豬飼料、動物可食性組織和牛奶中玉米赤霉烯酮及其代謝產物的酶聯免疫方法及其試劑盒。本發明制備的單克隆抗體靈敏度較高，廣譜，檢測的準確度高，精密度好，具有簡便、快速、易操作等有點。

技術領域

本發明屬于獸藥殘留分析和免疫學技術領域，具體涉及一種能識別玉米赤霉烯酮及其代謝產物的單克隆抗體以及酶聯免疫方法(ELISA)與試劑盒。

背景技術

玉米赤霉烯酮(ZEN)是黃色鐮刀菌和禾谷鐮刀菌等鐮刀菌屬真菌的次級代謝產物，主要污染玉米、小麥、大米、大麥、及燕麥等谷物。玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于雌性動物生殖系統，引起繁殖機能異常甚至死亡，具有基因毒性和致癌性，免疫毒性及生殖毒性。歐盟規定未加工谷物(不包括玉米)、面包以及嬰兒食品中ZEN的最大殘留限量分別為100、50.0、20.0μg kg^-1。中國則規定小麥及玉米中ZEN最大殘留限量為60.0μg kg^-1。動物攝入玉米赤霉烯酮后，可將其代謝為α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇以及玉米赤霉酮，而玉米赤霉烯醇同樣存在于谷物中。由于這些代謝物均具有較強的雌激素活性，故α-玉米赤霉醇曾被廣泛用作牛羊促生長劑，但因其能影響人體生殖系統發育，歐盟禁止將其用于動物源食品，我國也禁止將其用于食品動物促生長作用。

殘留檢測方法是準確判斷殘留是否超標的重要手段，要求具有較高的精確度和準確度。目前用于玉米赤霉烯酮類霉菌毒素檢測的方法主要有儀器分析法和免疫學檢測方法。儀器分析法具有檢測靈敏度高、選擇性好、分離效率高和應用范圍廣等優點，能夠滿足大多數霉菌毒素的檢測要求。但該類方法通常需要昂貴的儀器設備，對操作人員的技術要求較高，需要進行復雜的分析，更適用于對藥物的確認檢測而不適用于樣品的大量篩選。免疫學檢測方法，尤其是ELISA方法，具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點，能夠克服儀器分析的缺陷，是一種有效的大批量殘留篩選方法，有著巨大的發展前景。雖然目前基于單抗的玉米赤霉烯酮類霉菌毒素ELISA方法已有報道，但抗體靈敏度低、廣譜性差、檢測樣品種類單一，使得該類方法的應用受到一定局限。

發明內容

本發明的目的為：

(1)提供一種特異性識別玉米赤霉烯酮及其代謝產物的單克隆抗體；

(2)提供所述單克隆抗體在制備檢測玉米赤霉烯酮及其代謝產物的酶聯免疫試劑盒中的應用；

(3)利用該單克隆抗體，建立一種能檢測玉米赤霉烯酮及其代謝產物的ELISA方法；

(4)提供所述酶聯免疫檢測試劑盒在玉米赤霉烯酮及其代謝產物檢測中的應用。

上述目的是通過以下技術方案實現的：

一種單克隆抗體，能識別玉米赤霉烯酮及其代謝產物，它是由保藏號為CCTCC NO:C201781的雜交瘤細胞株ZEN/6C2所分泌的。

所述代謝產物為α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮。

所述的雜交瘤細胞株ZEN/6C2，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCCNO:C201781。它是以玉米赤霉烯酮(ZEN)與NH₃反應生成半抗原(7-NH₂-ZEN)，再將 7-NH₂-ZEN與牛血清白蛋白(BSA)通過戊二醛(GA)方法偶聯得到偶聯物 (7-NH₂-ZEN-GA-BSA)，該偶聯物作為免疫原免疫動物后制備得到的。所述半抗原的結構式如下：