[發明專利]同時分析牛基因組DNA16個基因座的熒光檢測試劑盒

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• 申請號: 201710615931.6
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN109136384A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 李翔;葛斌文;陳拓
• 申請（專利權）人: 江蘇蘇博生物醫學科技南京有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種可以同時分析16個?；蜃臒晒鈽擞洀秃蠑U增檢測試劑盒，其特征在于：包含16個基因座TGLA227、BM2113、TGLA53、ETH10、SPS115、TGLA126、TGLA122、INRA023、CSSM66、ETH3、ETH225、BM1824、BM1818、BAmel、G18833和BM720，分為4組，共涉及5種顏色的熒光標記。本發明的熒光標記復合擴增檢測試劑盒提供用于復合擴增16個基因座的寡核苷酸引物混合物；系統中包括的用于鑒別DNA樣本性別的基因座是BAmel基因座。該系統的檢測結果表明其多態性高、平衡性好、靈敏度高、特異性強、分型結果準確、種屬特異性強，完全能夠滿足牛類個體識別、親權鑒定以及DNA數據庫建設的需要。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種熒光標記復合擴增檢測試劑盒，具體涉及一種通過復合擴增同時分析牛基因組DNA 15個STR基因座和DAmel基因座的五色熒光標記復合擴增檢測試劑盒。

背景技術

短串聯重復序列(簡稱STR)也稱微衛星DNA，是一類廣泛存在于原核及真核生物基因組中的核苷酸重復序列。其一般由2-6個核苷酸為重復單元組成的幾十至一百多個的核苷酸重復序列，不同數目的核心序列呈串聯重復排列，而長度呈現多態性。根據兩端保守性序列，設計引物，進行PCR，然后通過聚丙烯酰胺、瓊脂糖凝膠電泳或毛細管電泳等檢測STR遺傳標記的多態性。

STR基因座具有片段小易擴增，各基因座的擴增條件相似能夠構建檢測試劑盒的特點，因而具有靈敏度高、準確性強、檢測快速、信息量大等優點，尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優越性。長期的DNA檢測實踐表明，STR基因座的遺傳多樣性在品種間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大?，F在市場上，在牛類的個體識別、親權鑒定和遺傳育種等方面多采用美國ABI公司推薦的StockMarks AnimalGenotyping System的11個?；蜃?。

在實現發明的過程中，發明人發現現有的技術至少存在以下問題：美國ABI公司推薦的StockMarks Animal Genotyping System中僅有11個牛基因座，而且部分基因座的遺傳多態性不高，或是不同牛群間差異較大，由此給DNA檢測技術的應用及其效率帶來一定的影響，不能滿足使用的要求。

發明內容

發明目的

本發明的目的在于提供一種牛16個基因座的熒光標記復合擴增檢測試劑盒，提高了系統的累計個體識別力和累積非父排除率，滿足牛的個體識別、親權鑒定和遺傳育種等方面應用的需要。

為實現上述目的，采用如下技術方案實現：

一種同時分析?；蚪MDNA 16個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒含有的引物混合物如下：

上述16個基因座對應的引物對中至少有一條引物的5′端進行熒光染料標記。

作為一種優化方式所述的16個基因座對應的引物分為四組并分別用四種不同的熒光染料進行標記；其中TGLA227、BM2113、TGLA53、ETH10和SPS115為一組，TGLA126、TGLA122、INRA023和CSSM66為一組，ETH3、ETH225、BM1824和BM1818為一組，BAmel、G18833和BM720為一組；

其中所述的四種熒光染料為FAM、HEX、TANRA和ROX。