[發明專利]一種以頂芽為外植體的多花黃精快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201710615921.2
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN109302983B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 沈寶明;譚著明;楊碩知;申愛榮;譚云
• 申請（專利權）人: 湖南省林業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明公開了一種利用組織培養技術進行多花黃精種苗快速繁殖的方法。其特征在于包含了外植體選擇、消毒等處理、愈傷組織的誘導、愈傷組織的增殖、愈傷組織分化及不定芽形成、不定芽根的誘導培養、煉苗和移栽等步驟的多花黃精組織培養快速繁殖體系。其顯著特征是，以多花黃精頂芽作外植體，用70～75％的酒精和5～18％的NaClO組合消毒，快繁體系污染率可控制在5％以下。依據該快繁體系，6個月內，繁殖系數達80倍左右，即一個頂芽平均可產生80多棵組培苗。后期因可省卻愈傷組織誘導過程，愈傷組織能持續分化，從而更利于組培苗的生產。本方法是一種高效、快捷、環境友好的繁殖技術體系，短期內可實現多花黃精良種的規模化生產。

技術領域

本發明涉及藥用植物的組織培養技術，尤其涉及多花黃精的組織培養技術，包括外植體選擇、消毒等處理、愈傷組織的誘導、愈傷組織的增殖、愈傷組織分化、不定芽形成、不定芽的生根培養、煉苗和移栽等步驟。

背景技術

黃精是我國傳統中藥材，為百合科黃精屬多年生草本植物。多花黃精是《中華人民共和國藥典》2015 年版收藏的黃精屬3種原生藥之一，又稱姜形黃精。其性味甘平，補氣養陰，健脾，潤肺，益腎。用于脾胃氣虛，體倦乏力，胃陰不足，口干少食，肺虛燥咳，精血不足，腰膝酸軟，須發早白，內熱消渴等癥。

多花黃精的繁殖主要有塊莖繁殖和種子繁殖兩種。生產上，塊莖繁殖主要靠采挖野生塊莖為種源進行無性繁殖，繁殖系數低，用量巨大，對自然野生資源構成巨大破壞；同時，連續多代的塊莖繁殖，常造成植株內病毒富積而退化，個體生長勢逐漸變弱，產量越來越低。種子繁殖時，因種子休眠期長、不易萌發、發芽率低等原因，生長速度不如塊莖繁殖方法。組織培養是一種十分有效的快速繁殖手段。應用該方法，可在短期內得到大量的種苗。

迄今，已有多人對多花黃精的組織培養方法進行了研究^[1～5]，研究者多選用地下塊莖和塊莖之芽點為研究材料，此材料因不可避免地附帶大量細菌和真菌，消毒十分困難。因此，上述研究工作無一例外地依賴高效滅菌劑—HgCl₂消毒。但HgCl₂的重金屬殘留往往會對植物造成傷害，廢液的不當處理也會對環境造成危害。因此，這些方法均不適于規模化生產時采用。同時，上述研究結果表明，用上述組織培養方法獲得的多花黃精的繁殖系數只有10左右，效率比較低下，意味著使用這些方法進行規模化生產時，成本會居高難下。

發明內容

解決的技術問題：針對現有組培技術存在的不足，本發明提供了一種簡便、高效、免HgCl₂消毒的多花黃精外植體消毒方法，同時提供了一整套多花黃精的組織培養技術。

技術方案：一種以頂芽為外植體的多花黃精種苗快速繁殖方法，其特征在于包括以下7個步驟：

(1)外植體的選擇；

(2)外植體的消毒；

(3)外植體的處理；

(4)愈傷組織的誘導；

(5)愈傷組織的增殖和分化；

(6)生根培養；

(7)煉苗移栽。

上述步驟(1)方法如下：選擇多花黃精的頂芽為外植體，是指于3月下旬至4月上旬，從地下塊莖萌動并長出地面5cm以上，干凈、無明顯污物、嫩葉尚未展開的直立莖尖。用利剪在莖尖以下約3cm處剪切，即得頂芽。此頂芽可進行后續處理；

上述步驟(2)方法如下：將步驟1所得頂芽進行表面消毒，具體方法是：用自來水將頂芽表面沖洗干凈后，置于超凈工作臺之無菌器皿上，按照無菌操作規范，先用70～75％的酒精浸泡10～30s，優選15～20s；然后用無菌水沖洗一次，再用5～18％的NaClO浸泡3～10min，優選9～15％的NaClO浸泡4～8min；隨后用無菌水沖洗三次備用；