[發明專利]聚合酶組合物、制備和使用所述聚合酶組合物的方法有效
| 申請號： | 201710614722.X | 申請日： | 2012-08-10 |
| 公開（公告）號： | CN107326079B | 公開（公告）日： | 2021-04-20 |
| 發明（設計）人： | P·范德霍恩;T·尼基弗羅夫;羅國斌;M·蘭狄斯;D·馬祖爾;E·托澤;T·林斯庫姆 | 申請（專利權）人： | 生命技術公司 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686;C12N9/12 |
| 代理公司： | 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038 | 代理人： | 劉曉東 |
| 地址： | 美國加*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 聚合 組合 制備 使用 方法 | ||
1.一種用于進行核酸擴增的方法，包括：
產生具有修飾的聚合酶、引物、核酸模板以及一個或多個核苷酸的擴增反應混合物，其中所述修飾的聚合酶由選自D732R、E471K或E745Q的氨基酸取代修飾的SEQ ID NO:15所示序列組成，所述修飾的聚合酶相對于SEQ ID NO:15所示序列的參照聚合酶具有增加的解離時間常數；和
將擴增反應混合物經歷擴增條件，其中使用所述修飾的聚合酶將所述一個或多個核苷酸的至少一個聚合至引物的末端。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述擴增條件包括高離子強度溶液的存在。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述高離子強度溶液含有100mM至500mM的鹽。
4.如權利要求3所述的方法，其中所述鹽包括NaCl和/或KCl。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述修飾的聚合酶中氨基酸取代是D732R。
6.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述修飾的聚合酶中的氨基酸取代是E745Q。
7.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述修飾的聚合酶中的氨基酸取代是E471K。
8.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述核酸擴增反應是克隆擴增反應。
9.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述擴增條件包括通過乳液聚合酶鏈式反應擴增所述核酸模板。
10.一種修飾的聚合酶，其由選自D732R、E471K或E745Q的氨基酸取代修飾的SEQ IDNO:15所示氨基酸序列組成，所述修飾的聚合酶相對于SEQ ID NO:15所示的序列的參考聚合酶而言具有增加的解離時間常數。
11.如權利要求10所述的修飾的聚合酶，其中所述修飾的聚合酶中氨基酸取代是D732R。
12.如權利要求10所述的修飾的聚合酶，其中所述修飾的聚合酶中氨基酸取代是E745Q。
13.如權利要求10所述的修飾的聚合酶，其中所述修飾的聚合酶中氨基酸取代是E471K。
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