[發(fā)明專利]一種用于檢測微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的組合物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710612301.3
• 申請日: 2017-07-25
• 公開（公告）號: CN107299139B
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉沛;王林海
• 申請（專利權(quán)）人: 北京鑫諾美迪基因檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11357
• 代理人: 孫艷敏;楊敬

本發(fā)明公開了一種用于檢測微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的組合物及其應(yīng)用，用于檢測微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的組合物包括分別針對用于檢測待檢樣品中與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性相關(guān)的特異性目的基因的引物對，用于檢測微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的試劑盒采用特異性的多重?zé)晒釶CR片段分析毛細(xì)管電泳法檢測Bat 26、Bat 25、NR?21、NR?24、NR?27、Mono?27、D5S346、D2S123和D17S250這9個位點和Penta C、Penta D、Amel這3個位點的微衛(wèi)星分布情況，用于判斷微衛(wèi)星是處于穩(wěn)定還是不穩(wěn)定狀態(tài)。通過調(diào)整12對引物的配比、Taq酶的用量、鎂離子的用量和PCR體系等，提高整個試劑盒的敏感性和特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的技術(shù)。

背景技術(shù)

結(jié)直腸癌(Colorectal Cancer,CRC)發(fā)生的遺傳因素包括染色體不穩(wěn)定性(Chromosome Instability,CIN)和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(Microsatellite Instability,MSI)。約80-85％的CRC由CIN引起，包括家族性腺瘤性息肉病(Familial adenomatouspolyposis,FAP)(APC基因胚系突變)和散發(fā)性CRC(APC、P53、DCC、KRAS等基因突變)；而另外15-20％的CRC則主要是由MSI引起，包括遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌(HereditaryNonpolyposis Colorectal Cancer,HNPCC，又稱Lynch綜合征)(錯配修復(fù)基因胚系突變)和散發(fā)性MSI(+)CRC(錯配修復(fù)基因MLH1基因啟動子甲基化)。

微衛(wèi)星不穩(wěn)定(Microsatallite Instability，MSI)表現(xiàn)為同一微衛(wèi)星位點在不同個體之間以及同一個體的正常組織與某些異常組織之間，微衛(wèi)星位點的重復(fù)單位的數(shù)目不同。近年來的大量研究表明：MSI與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，如結(jié)直腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等。尤其是結(jié)直腸癌，臨床上已將MSI作為結(jié)直腸癌預(yù)后和制定輔助治療方案的重要分子標(biāo)志物。據(jù)文獻(xiàn)報道，大約15％的結(jié)直腸癌中存在MSI現(xiàn)象，與無MSI的結(jié)直腸癌相比，攜帶有MSI-H的II期結(jié)直腸癌患者預(yù)后較好，但從5-FU輔助化療獲益較少。

Lynch綜合征，亦稱遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌(HNPCC)，是由MMR基因胚系突變所致的顯性遺傳病。90％以上的Lynch綜合征具有MSI特征，而散發(fā)性結(jié)直腸癌中只有約15％，所以臨床上可用MSI檢測來進(jìn)行Lynch綜合征的篩查。

2015年在新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志發(fā)表的NCT01876511研究結(jié)果表明，PD-1單抗治療對MSI-H的mCRC表現(xiàn)出高緩解率，因此PEMBRO單抗治療MSI-H的mCRC獲得FDA突破性療法認(rèn)定。2016年ASCO年會上發(fā)布的CheckMate-142，Ⅱ期研究的數(shù)據(jù)表明，MSI-H的mCRC患者不僅可從PD-1免疫治療獲益，而且對PD-1和CTLA-4聯(lián)合治療的臨床活性和生存期都遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了單獨使用PD-1的療效。2017年5月23日，美國FDA批準(zhǔn)了默沙東公司的“明星”PD-1抗體pembrolizumab(商品名：Keytruda)用于治療攜帶一種特定基因特征的任何一種實體瘤，具體來說，Keytruda被批準(zhǔn)用于治療攜帶“MSI-H/dMMR亞型”的成人和兒童實體瘤患者。

1997年，NCI推薦使用Bat 26、Bat 25、D5S346、D2S123和D17S250 5個位點檢測腫瘤，若其中2個或2個以上位點有改變則為高頻率MSI(MSI-H)，有1個位點改變則為低頻率MSI(MSI-L)，沒有改變則稱為微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)。在2002年NCI研討會中，由于雙核苷酸D5S346、D2S123和D17S250位點的靈敏度和特異性檢測受限、均低于單核苷酸，修改了MSI檢測指南，主要推薦使用更多的單核苷酸進(jìn)行檢測(在雙核苷酸不穩(wěn)定情況下)。目前研究報道，檢測的單核苷酸位點有Bat 26、Bat 25、NR-21、NR-24、NR-27、Mono-27，雙核苷酸位點有D5S346、D2S123和D17S250。