[發(fā)明專(zhuān)利]一種明膠中硝基呋喃類(lèi)獸藥殘留物的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710611340.1
• 申請(qǐng)日: 2017-07-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107462655A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 靳貴英;林生文;鄭傳奇;劉亞雄
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東省藥品檢驗(yàn)所（廣東省藥品質(zhì)量研究所;廣東省口岸藥品檢驗(yàn)所）
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/06
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44205
• 代理人: 胡輝,舒勝英

1.一種明膠中硝基呋喃類(lèi)獸藥殘留物的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

一、溶液的制備

混合內(nèi)標(biāo)溶液的制備：用甲醇配制AOZ-D₄、AMOZ-D₅、AHD-¹³C₃、SEM﹒HCl-¹³C-¹⁵N₂這四種內(nèi)標(biāo)的混合內(nèi)標(biāo)溶液；

供試品溶液制備：

1)取明膠樣品加入胰酶，加入混合內(nèi)標(biāo)溶液，再加入鹽酸溶液，最后加入2-NBA，，振蕩混勻，35～39℃恒溫水浴過(guò)夜；所述明膠與胰酶的質(zhì)量比為1.7～2.3：1；

2)將上述樣品冷卻至室溫，加入磷酸鈉溶液，再用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.4±0.2，加乙酸乙酯，旋渦振蕩10～20min，離心取乙酸乙酯層，將水層用乙酸乙酯重復(fù)提取1～2次，合并所有乙酸乙酯層，于38～42℃氮?dú)獯蹈桑挥靡译?水混合液溶解，再用乙腈飽和的正己烷提取兩次，棄去正己烷層，合并水溶液，過(guò)濾膜，得供試品溶液；

對(duì)照品溶液制備：用甲醇配制系列不同濃度的AOZ、SEM、AMOZ、AHD混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，將不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液按照供試品溶液的制備方法，得到系列不同濃度的對(duì)照品溶液；

二、測(cè)定

將上述制備的供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)行LC-MS/MS測(cè)定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述混合內(nèi)標(biāo)溶液中內(nèi)標(biāo)的濃度為20ng/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述供試品溶液制備的具體操作為：

1)取2.0g明膠樣品，加胰酶1.0g，加入20ng/ml內(nèi)標(biāo)溶液100μl，再加入0.2mol/L鹽酸溶液20ml，最后加入100mmol/L 2-NBA 100μl，混合，振蕩5～10min，37℃恒溫水浴14～16h；

2)將上述樣品冷卻至室溫，加入0.3mol/L磷酸鈉溶液1ml，再用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.4±0.2，加乙酸乙酯5ml，旋渦振蕩10～20min，離心取乙酸乙酯層，將水層用乙酸乙酯重復(fù)提取1次，合并乙酸乙酯層，于40℃，氮?dú)獯蹈桑挥?ml體積比為20:80的乙腈-水溶液溶解，再用乙腈飽和的正己烷2ml提取兩次，棄去正己烷層，合并水溶液，過(guò)0.25μm濾膜，得供試品溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，對(duì)照品溶液制備的具體操作為：稱(chēng)取AOZ、SEM、AMOZ、AHD，用甲醇配制成濃度分別為0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml和20ng/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml，按照供試品溶液的制備方法，得到系列不同濃度的對(duì)照品溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，MS檢測(cè)時(shí)的條件為：

碰撞氣壓力mTorr：1.5，

質(zhì)譜分辨率FWHM:0.70，

傳輸管溫度℃:350.0，

汽化氣溫度℃:300.0，

鞘氣壓力不Arb:45.0，

輔助氣壓力Arb:15.0，

噴霧電壓V：3500，采用正離子掃描。