[發明專利]免疫熒光層析檢測試紙條、免疫熒光層析檢測系統以及確定樣品中待測物含量的方法

有效

• 申請號: 201710608436.2
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107632159B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 王國新;廖滔;唐梅杰;楊晴來;趙肅
• 申請（專利權）人: 深圳清華大學研究院;深圳無微華斯生物科技有限公司;納邁達斯生物科技中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明提出了免疫熒光層析檢測試紙條、免疫熒光層析檢測系統以及確定樣品中待測物含量的方法。所述免疫熒光層析檢測試紙條包括：本體，所述本體上限定出依次相連的樣品區、結合區、檢測區、吸附區；熒光微球標記的第一抗體，所述第一抗體包被于所述結合區，所述第一抗體特異性識別待測物；檢測線和質控線，所述檢測線和質控線設置在所述檢測區中；第二抗體，所述第二抗體包被于所述檢測線上，所述第二抗體特異性識別所述待測物；以及第三抗體，所述第三抗體包被于所述質控線上，所述第三抗體特異性識別所述第一抗體，其中，所述熒光微球為近紅外II區高分子熒光微球。利用本發明的免疫熒光層析檢測試紙條檢測的準確性強、靈敏度高、精密度高。

技術領域

本發明涉及生物領域。具體地，本發明涉及免疫熒光層析檢測試紙條、免疫熒光層析檢測系統以及確定樣品中待測物含量的方法。

背景技術

聚合物熒光微球作為一種特殊的功能微球，每個微球中可包裹數萬甚至數十萬個熒光分子，可大大提高熒光的標記效率，增強熒光分子的抗光漂白性能，極大地提高分析靈敏度；同時熒光微球表面可非常靈活地修飾多種功能基團(如羧基、氨基、醛基等)，有利于與蛋白或抗體的共價偶聯和提高標記物的穩定性和標記效率。目前，熒光微球已廣泛應用于標記、示蹤、檢測、成像、固定化酶、免疫醫學、高通量藥物篩選等。但是，傳統熒光微球的發射均在可見光區域(發射波長小于780nm)，將其應用在生物活體、細胞或組織成像和體外診斷等領域時，容易造成熒光穿透性能差，背景熒光強。同時，由于其熒光量子效率普遍較低、激發和發射波長比較靠近(通常在20nm左右)等原因引起分析靈敏度降低，對熒光檢測所需濾色片的要求很高。

因此，聚合物熒光微球有待進一步研究改進。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種免疫熒光層析檢測試紙條、免疫熒光層析檢測系統、確定樣品中待測物含量的方法。本發明的免疫熒光層析檢測試紙條上包被有熒光微球標記的抗體，該熒光微球的熒光量子效率高，且激發(365nm或740nm)和發射(900-1400nm)的波長，熒光檢測時具有穿透能力強、背景干擾小的特點，從而使得檢測結果的準確性強、靈敏度高、精密度高。

本發明主要是基于以下發現完成的：傳統熒光微球熒光穿透性能差，背景熒光強，且由于熒光量子效率低、激發和發射波長比較靠近等原因，引起分析靈敏度降低、對濾色片要求很高。近紅外熒光微球，尤其是近紅外II區熒光微球熒光發射具有穿透力強、背景干擾小等特點，在活體成像、生物標記檢測等方面具有良好的應用前景。然而，目前制備近紅外II區熒光微球的方法仍具有局限性，例如針對疏水性強的熒光染料，無法直接應用于活體成像，必須要先進行親水性改性，這種改性過程不僅步驟繁瑣，且改性后的熒光染料分散在水溶液中后，其量子效率大幅度降低，嚴重影響熒光檢測時的靈敏度。

有鑒于此，發明人發現可以利用溶脹法將熒光染料包裹在高分子微球內部，效果非常理想，該微球熒光量子效率可達到20％以上，在水溶液中可良好分散，方便各種生物大分子的標記，且針對不同熒光染料具有廣泛適用性。進一步地，將獲得的熒光微球標記于抗體上，并將該抗體包被于試紙條的結合區，從而使得利用該試紙條檢測的準確性強、靈敏度高、精密度高。

為此，在本發明的一個方面，本發明提出了一種免疫熒光層析檢測試紙條。根據本發明的實施例，所述試紙條包括：本體，所述本體上限定出依次相連的樣品區、結合區、檢測區、吸附區；熒光微球標記的第一抗體，所述第一抗體包被于所述結合區，所述第一抗體特異性識別待測物；檢測線和質控線，所述檢測線和質控線設置在所述檢測區中，且所述檢測線靠近結合區；第二抗體，所述第二抗體包被于所述檢測線上，所述第二抗體特異性識別所述待測物；以及第三抗體，所述第三抗體包被于所述質控線上，所述第三抗體特異性識別所述第一抗體，其中，所述熒光微球為近紅外II區高分子熒光微球，所述近紅外II區高分子熒光微球是通過下列方法獲得的：

(1)利用與水不混溶的有機溶劑對熒光染料進行溶解，以便得到熒光染料溶液；