[發明專利]基于近紅外II區熒光微球的免疫熒光層析檢測試紙條、檢測系統以及檢測方法

有效

• 申請號: 201710607934.5
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107607710B
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 王國新;廖滔;唐梅杰;楊晴來;趙肅
• 申請（專利權）人: 深圳清華大學研究院;深圳無微華斯生物科技有限公司;納邁達斯生物科技中心
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

1.一種免疫熒光層析檢測試紙條，其特征在于，包括：

本體，所述本體上限定出依次相連的樣品區、結合區、檢測區、吸附區；

熒光微球標記的第一抗體，所述第一抗體包被于所述結合區，所述第一抗體特異性識別待測物；

檢測線和質控線，所述檢測線和質控線設置在所述檢測區中，且所述檢測線靠近所述結合區；

第二抗體，所述第二抗體包被于所述檢測線上，所述第二抗體特異性識別所述待測物，所述第一抗體和第二抗體特異性識別所述待測物的位點并不相同；以及

第三抗體，所述第三抗體包被于所述質控線上，所述第三抗體特異性識別所述第一抗體，

其中，所述熒光微球為近紅外II區高分子熒光微球，所述近紅外II區高分子熒光微球是通過下列方法獲得的：

(1)將熒光染料溶解于二氯甲烷中，以便得到濃度為20mg/mL的熒光染料溶液，所述熒光染料具有式I所示結構；

(2)將190ml水加入至燒瓶中，70度水浴，然后加入16mg SDS作為乳化劑、0.05g碳酸氫鈉作為緩沖試劑，攪拌后往燒瓶中加入8ml苯乙烯和0.8mL丙烯酸，一小時后加入0.2g過硫酸鉀，氮氣保護下聚合反應18小時，反應結束后用乙醇和水溶液離心洗滌，得到羧基聚苯乙烯微球，將所述羧基聚苯乙烯微球分散在SDS水溶液中，以便得到微球載體溶液，其中，所述羧基聚苯乙烯微球的粒徑為20nm～1000nm；

(3)將2mL濃度為20mg/mL的所述熒光染料溶液加入燒瓶中與20mL的30mg/ml的所述微球載體溶液超聲混合，并于40攝氏度下磁力攪拌6h；將混合物溶液于50攝氏度水浴中磁力攪拌，使混合物溶液中的二氯甲烷完全揮發；所得產物離心分離后用乙醇超聲清洗，再用水超聲清洗，以便獲得所述近紅外II區高分子熒光微球。

2.根據權利要求1所述的免疫熒光層析檢測試紙條，其特征在于，所述待測物為心肌肌鈣蛋白，

所述第一抗體為心肌肌鈣蛋白抗體1；

所述第二抗體為心肌肌鈣蛋白抗體2，

所述第三抗體為二抗。

3.根據權利要求1所述的免疫熒光層析檢測試紙條，其特征在于，所述第三抗體為羊抗鼠抗體。

4.一種免疫熒光層析檢測系統，其特征在于，包括：

熒光免疫分析儀；以及

權利要求1～3任一項所述的免疫熒光層析檢測試紙條。

5.一種非診斷目的確定樣品中待測物含量的方法，其特征在于，包括：

(1)將所述樣品施加至權利要求1～3任一項所述的免疫熒光層析檢測試紙條的樣品區內；

(2)確定所述免疫熒光層析檢測試紙條的熒光信號；以及

(3)基于所述免疫熒光層析檢測試紙條的熒光信號，確定所述樣品中待測物含量。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述樣品為血清樣品。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，利用熒光免疫分析儀確定所述熒光信號。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述熒光免疫分析儀采用800nm的長波通濾色片。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，同時確定所述檢測線的熒光信號和所述質控線的熒光信號，

在步驟(3)中，基于所述檢測線的熒光信號與所述質控線的熒光信號的比值，確定所述樣品中所述待測物的含量。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，利用標準曲線，基于所述檢測線的熒光信號與所述質控線的熒光信號的比值，確定所述樣品中所述待測物的含量。