[發明專利]一種細菌營養培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 201710607846.5
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107400642A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 王雷;郅永偉;李振海;薛家兵
• 申請（專利權）人: 內蒙古東達獺兔循環產業研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 北京名華博信知識產權代理有限公司11453
• 代理人: 李冬梅,苗源

技術領域

本發明涉及獸醫微生物領域，尤其涉及一種細菌營養培養基及其制備方 法。

背景技術

目前，畜牧業養殖場中病原菌會導致牲畜患病，并且難以通過臨床癥狀 對病原菌導致的疾病進行準確的診斷，導致用藥不準以及藥物濫用。例如， 對于兔場而言，巴氏桿菌、波氏桿菌和魏氏梭菌等為獺兔發病的主要病原菌， 但是難以通過臨床癥狀對上述病原菌導致的疾病進行準確的診斷，導致用藥 不對癥，或者用藥對癥但是用量過多過少造成致病菌對一些常用抗生素產生 耐藥性，導致用藥對癥卻沒有明顯效果。為了能夠有效快捷的治療病原菌， 一般的方式是：通過提供一種能夠對一般細菌均可進行培養的全營養培養 基，進行細菌的培養，然后通過藥敏實驗對培養基中的細菌進行藥物敏感度 測定，通過細菌對藥物敏感度的高低以決定使用哪種藥物以及使用多少含 量，從而準確有效的對病原菌導致的疾病進行治療。

目前被相關技術人員廣泛接受的可用于對一般細菌均能夠進行培養且 用來進行快速藥敏實驗的全營養培養基為三種：(1)高氏一號培養基、(2) 營養瓊脂培養基、(3)加血清血紅素的普通兔鮮血培養基。但是這三種培 養基均存在一定的問題，例如高氏一號培養基屬于合成培養基，這種培養基 的各種成分是已知的各種化學物質，微生物在這類培養基中生長較慢。

另外，培養基的質量受培養基制備過程的影響。目前，培養基制備過程 中通常會存在以下問題：培養基制備過程不科學，導致制得的培養基對于細 菌的培養效果不好。

因此，提供一種能夠對一般細菌均可進行培養的全營養培養基，并且可 利用此培養基進行藥敏實驗，從而準確有效的利用藥物對病原菌導致的疾病 進行治療以及提供一種能夠制備這種全營養培養基的制備方法，使制得的培 養基對于一般細菌具有良好的培養效果具有重要意義。

發明內容

本發明旨在解決上面描述的問題。本發明的目的是提供一種針對一般細 菌均可培養的全營養培養基及其制備方法。

根據本發明的一個方面，提供一種用于制備細菌營養培養基的方法，所 述細菌為導致兔發病的病原菌，所述制備方法包括下述步驟：

步驟1，制備兔肝粉；

步驟2，取0.6～1.0L的水加入燒杯中，量取兔肝粉25～35g，NaCl 3～7g， 檸檬酸鈉1～3g，葡萄糖5～15g，乳糖5～15g，甘露醇5～15g溶解于水中并 攪拌均勻，得到混合均勻的混合液，然后量取瓊脂15～25g加入混合液中， 在90℃～98℃下對混合液加熱至瓊脂完全融化，并在此加熱過程中不斷攪拌 混合液；

步驟3，在步驟2中所得的加入瓊脂的混合液中補加水0.1～0.3L，然后 加入pH調節劑，將混合液的pH值調節至6.8～7.5；

步驟4，將步驟3所得調節PH值之后的混合溶液在120℃～122℃， 101～102KPa的條件下高溫滅菌18～22分鐘，得到高溫滅菌后的混合溶液；

步驟5，將步驟4中高溫滅菌后的混合溶液冷卻至44℃～55℃，加入兔 鮮血75～85ml攪拌均勻得到所述細菌營養培養基。

具體地，所述制備兔肝粉的步驟還包括：

步驟11，取生兔肝臟140～160g，加水150～200ml煮沸8～12分鐘，去水 研磨成肉糊；

步驟12，在步驟11所得肉糊中添加蛋白酶攪拌均勻，將攪拌均勻的肉 糊置于55～65℃下保溫11～13小時得到保溫后的肉糊，對保溫后的肉糊加水 300～500ml進行水煮煮沸12～17分鐘使保溫后的肉糊中的蛋白酶失活，并形 成兔肝臟漿液；

步驟13，將步驟12中獲得的兔肝臟漿液在離心機中以2800～3200轉/分 鐘的轉速離心處理4～6分鐘，過濾掉殘渣和油，得到過濾后的兔肝臟漿液， 將所述過濾后的兔肝臟漿液干燥形成兔肝粉。

其中，蛋白酶用量為0.29～0.31萬U/g。

具體地，所述制備方法包括下述步驟：

步驟1，制備兔肝粉；

步驟2，取0.8L的水加入燒杯中，量取兔肝粉30g，NaCl 5g，檸檬酸鈉 2g，葡萄糖10g，乳糖10g，甘露醇10g溶解于水中并攪拌均勻，得到混合 均勻的混合液，然后量取瓊脂20g加入混合液中，在95℃下對混合液加熱至 瓊脂完全融化，并在此加熱過程中不斷攪拌混合液；

步驟3，在步驟2中所得的加入瓊脂的混合液中補加水0.2L，然后加入 pH調節劑，將混合液的pH值調節至7.2；