[發(fā)明專利]一種細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710607839.5
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107400696A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王雷;郅永偉;李振海;薛家兵
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古東達獺兔循環(huán)產(chǎn)業(yè)研究院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京名華博信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11453
• 代理人: 李冬梅,苗源

1.一種用于制備細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所述細(xì)菌為導(dǎo)致兔發(fā)病的病原菌，所述制備方法包括下述步驟：

步驟1，制備兔肉粉；

步驟2，取0.6～1.0L的水加入燒杯中，量取兔肉粉25～35g，NaCl 3～7g，檸檬酸鈉1～3g，葡萄糖5～15g，乳糖5～15g，甘露醇5～15g溶解于水中并攪拌均勻，得到混合均勻的混合液，然后量取瓊脂15～25g加入混合液中，在90℃～98℃下對混合液加熱至瓊脂完全融化，并在此加熱過程中不斷攪拌混合液；

步驟3，在步驟2中所得的加入瓊脂的混合液中補加水0.1～0.3L，然后加入pH調(diào)節(jié)劑，將混合液的pH值調(diào)節(jié)至6.8～7.5；

步驟4，將步驟3所得調(diào)節(jié)PH值之后的混合溶液在120℃～122℃，101～102KPa的條件下高溫滅菌18～22分鐘，得到高溫滅菌后的混合溶液；

步驟5，將步驟4中高溫滅菌后的混合溶液冷卻至44℃～55℃，加入兔鮮血75～85ml攪拌均勻得到所述細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基。

2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基制備方法，其特征在于，所述制備兔肉粉的步驟還包括：

步驟11，取生兔肉140～160g，加水150～200ml煮沸8～12分鐘，去水研磨成肉糊；

步驟12，在步驟11所得肉糊中添加蛋白酶攪拌均勻，將攪拌均勻的肉糊置于55～65℃下保溫11～13小時得到保溫后的肉糊，對保溫后的肉糊加水300～500ml進行水煮煮沸12～17分鐘使保溫后的肉糊中的蛋白酶失活，并形成兔肉漿液；

步驟13，將步驟12中獲得的兔肉漿液在離心機中以2800～3200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心處理4～6分鐘，過濾掉殘渣和油，得到過濾后的兔肉漿液，將所述過濾后的兔肉漿液干燥形成兔肉粉。

3.如權(quán)利要求2所述的細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基制備方法，其特征在于，所述蛋白酶用量為0.29～0.31萬U/g。

4.如權(quán)利要求1或2所述的細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下述步驟：

步驟1，制備兔肉粉；

步驟2，取0.8L的水加入燒杯中，量取兔肉粉30g，NaCl 5g，檸檬酸鈉2g，葡萄糖10g，乳糖10g，甘露醇10g溶解于水中并攪拌均勻，得到混合均勻的混合液，然后量取瓊脂20g加入混合液中，在95℃下對混合液加熱至瓊脂完全融化，并在此加熱過程中不斷攪拌混合液；

步驟3，在步驟2中所得的加入瓊脂的混合液中補加水0.2L，然后加入pH調(diào)節(jié)劑，將混合液的pH值調(diào)節(jié)至7.2；

步驟4，將步驟3所得調(diào)節(jié)PH值之后的混合溶液在121℃，101KPa的條件下高溫滅菌20分鐘，得到高溫滅菌后的混合溶液；

步驟5，將步驟4中高溫滅菌后的混合溶液冷卻至50℃，加入兔鮮血80ml攪拌均勻得到所述細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基。

5.如權(quán)利要求4所述的細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基制備方法，其特征在于，所述制備兔肉粉的步驟還包括：

步驟11，取生兔肉30g，加水170ml煮沸10分鐘，去水研磨成肉糊；

步驟12，在步驟11所得肉糊中添加蛋白酶攪拌均勻，將攪拌均勻的肉糊置于60℃下保溫12小時得到保溫后的肉糊，對保溫后的肉糊加水400ml進行煮沸15分鐘使保溫后的肉糊中的蛋白酶失活，并形成兔肉漿液；

步驟13，將步驟12中獲得的兔肉漿液在離心機中以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心處理5分鐘，過濾掉殘渣和油，得到過濾后的兔肉漿液，將所述過濾后的兔肉漿液干燥形成兔肉粉。

6.如權(quán)利要求4所述的細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基制備方法，其特征在于，所述蛋白酶用量為0.3萬U/g。

7.如權(quán)利要求1所述的用于制備細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所述pH調(diào)節(jié)劑包括堿性調(diào)節(jié)劑或酸性調(diào)節(jié)劑，其中所述堿性調(diào)節(jié)劑包括NaHCO₃、NaOH中的至少一種，所述酸性調(diào)節(jié)劑包括HCl。

8.一種如權(quán)利要求1～7中任一項所述方法制備的細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基，其特征在于，所述細(xì)菌為導(dǎo)致兔發(fā)病的病原菌，所述細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基包括兔肉粉、NaCl、檸檬酸鈉、葡萄糖、乳糖、甘露醇、兔鮮血、水以及瓊脂；其中，各組分的含量為：

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9.如權(quán)利要求8所述細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基，其特征在于，所述細(xì)菌營養(yǎng)培養(yǎng)基包括兔肉粉、NaCl、檸檬酸鈉、葡萄糖、乳糖、甘露醇、兔鮮血、水以及瓊脂；其中，各組分的含量為：

。