[發明專利]鑒定牡丹類黃酮糖基轉移酶基因的VIGS沉默體系

有效

• 申請號: 201710607382.8
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107245497B
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 舒慶艷;王亮生;朱瑾
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N15/83
• 分類號: C12N15/83;C12N15/66;C12N15/54
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 高芬芳

本發明公開了鑒定牡丹類黃酮糖基轉移酶基因的VIGS沉默體系。本發明所提供的鑒定牡丹類黃酮糖基轉移酶基因的VIGS沉默體系，包含：在VIGS沉默載體上插入目的基因得到的重組載體；所述目的基因為序列表中序列1所示核苷酸序列和/或序列表中序列3所示核苷酸序列。本發明利用同源克隆技術克隆了類黃酮糖基轉移酶基因PsUF3GT和PsUF5GT保守區段作為靶基因構建TRV2載體，成功建立了VIGS沉默體系，有效地降低了這兩個基因的表達量和總花青苷含量。本發明結果對牡丹基因功能研究具有重要意義，也為解析牡丹色斑形成的分子機制奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及鑒定牡丹類黃酮糖基轉移酶基因的VIGS沉默體系。

背景技術

牡丹(Paeonia suffruticosa)為芍藥科(Paeoniaceae)芍藥屬(Paeonia)牡丹組(Section Moutan)落葉亞灌木，是我國傳統名花。牡丹花色形成的化學基礎研究較為深入，花瓣中含有12種花青苷，即天竺葵素3-葡萄糖苷(Pg3G)、天竺葵素3,5-二葡萄糖苷(Pg3G5G)、矢車菊素3-葡萄糖苷(Cy3G)、矢車菊素3,5-二葡萄糖苷(Cy3G5G)、芍藥花素3-葡萄糖苷(Pn3G)、芍藥花素3,5-二葡萄糖苷(Pn3G5G)、矢車菊素3,5-二己糖苷(Cy-3,5-di-hexoside)、矢車菊素3-葡萄糖-5-阿拉伯糖苷(Cy3G5Ara)、矢車菊素3-阿拉伯糖苷(Cy3Ara)、矢車菊素3-沒食子酰葡萄糖苷(Cy3galloylG)；芍藥花素3-阿拉伯糖苷(Pn3Ara)和芍藥花素5-沒食子酰葡萄糖苷(Pn5galloylG)，其中Pg3G、Pg3G5G、Cy3G、Cy3G5G、Pn3G和Pn3G5G是主要的花青苷(Wang L S,Shiraishi A,Hashimoto F,Aoki N,Shimizu K,SakataY.2001.Analysis of petal anthocyanins to investigate flower coloration ofZhongyuan(Chinese)and Daikon Island(Japanese)tree peony cultivars.J PlantRes，114：33-43.；Wang L S,Hashimoto F,Shiraishi A,Aoki N,Li J J,SakataY.2004.Chemical taxonomy of the Xibei tree peony from China by floralpigmentation.J Plant Res，117：47-55.；李崇暉，2010.牡丹花瓣類黃酮成分分析及其對花色的影響，中國科學院植物研究所博士學位論文)，栽培品種尤其是西北牡丹品種群花瓣基部具有鮮艷、碩大的色斑，不僅增加了觀賞價值，而且常作為品種分類的重要依據之一，這些非斑部分花青苷主要由Pn3G5G、Cy3G5G和Cy3G組成，Pn3G含量很低，幾乎不含Pg型色素，推測花瓣基部Cy的糖苷化、甲基化和高含量是形成色斑的主要原因。Zhang et al.(2007)分析了35個西北牡丹品種花瓣的花青苷組成，斑中以Cy3G為主，非斑以Pn3G5G為主，斑中色素含量明顯高于非斑中的色素含量(Zhang J J,Wang L S,Shu Q Y,Liu Z A,Li CH,Zhang J,Wei X L,Tian D K.2007.Comparison of anthocyanins in non-blotchesand blotches of the petals of Xibei tree peony.Sci Hortic，114：104-111.)。可見花青苷的糖基化修飾在牡丹花色素的合成與積累過程中占有重要的地位(Wang L S,Shiraishi A,Hashimoto F,Aoki N,Shimizu K,Sakata Y.2001.Analysis of petalanthocyanins to investigate flower coloration of Zhongyuan(Chinese)and DaikonIsland(Japanese)tree peony cultivars.J Plant Res，114：33-43.)。