[發明專利]灌裝機無菌系統挑戰性實驗的方法在審

申請號：	201710603522.4	申請日：	2017-07-23
公開（公告）號：	CN107245511A	公開（公告）日：	2017-10-13
發明（設計）人：	張紀翠;黃涵	申請（專利權）人：	張紀翠;黃涵
主分類號：	C12Q1/22	分類號：	C12Q1/22;C12R1/125
代理公司：	暫無信息	代理人：	暫無信息
地址：	276600 山東省***	國省代碼：	山東;37
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摘要：
搜索關鍵詞：	灌裝無菌系統挑戰性實驗方法
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【權利要求書】：

1.灌裝機無菌系統挑戰性實驗的方法，其特征在于，所述方法包括以下檢驗過程：

(1)、對無菌室進行貼鋼片檢驗；

(2)、包裝材料外表面殺菌效果檢驗；

(3)、包裝材料內表面殺菌效果檢驗；

(4)、無菌室無菌空氣沉降菌測試檢驗。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述對無菌室進行貼鋼片檢驗的過程為：

(1)、將接種有Bacillus subtilis ATCC 9372芽孢的鋼片放入無菌室內不同位置，灌裝機對無菌室進行升溫滅菌，滅菌完成后取出鋼片放置于無菌采樣袋中；加入100ml 無菌0.1% Tween/0.1% 蛋白胨水到放置鋼片的無菌袋；放入超聲波清洗儀超聲波作用20min；所述鋼片上的芽孢濃度為10^7CFU/鋼片；

(2)、將放置鋼片的無菌袋加入100ml無菌0.1% Tween/0.1% 蛋白胨水進行清洗，劇烈震蕩1min，用0.45μm濾膜膜過濾，將過濾后的濾膜放到PCA平板35攝氏度培養5天；

(3)、殺菌后的鋼片對應平板如果有枯草芽孢桿菌類菌落生長，對其菌落進行鑒定。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述包裝材料外表面殺菌效果檢驗的過程為：

(1)、灌裝機升溫滅菌，將外表面接種有Bacillus subtilis ATCC 9372芽孢的包裝材料按照7.4s的速度通過灌裝機雙氧水槽，使包材在雙氧水槽中滅菌，滅菌后封合成包裝由排包口排出；所述包裝材料上的芽孢濃度為10^7CFU/包裝材料；

(2)、用無菌袋在排包口處收集200個殺菌后包裝樣品，其中包裝樣品不灌裝液體；

(3)、用無菌剪刀將接種處的包裝面剪下來，轉入新的無菌袋；

(4)、陽性對照：進行梯度稀釋，對芽孢濃度為10^7 CFU/包裝材料的菌落總數進行10^-2、10^-3、10^-4三個等級的稀釋，然后取10^-2、10^-3、10^-4的稀釋液各0.1ml到平板上，每個稀釋度要做2個平板，用PCA培養基在35℃條件下培養5天，與實驗后包裝樣品對照，出現同類枯草芽孢桿菌才算滅菌后剩余芽孢數量；

(5)、將100ml無菌0.1% Tween/0.1% 蛋白胨水加入裝有包裝樣品的無菌袋進行清洗，劇烈震蕩1min，然后膜過濾，將過濾后0.45μm 濾膜放到PCA平板35攝氏度培養5天；

(6)、殺菌后或者陰性對照的包裝材料對應平板如果有枯草芽孢桿菌類菌落生長，對其菌落進行鑒定。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述包裝材料內表面殺菌效果檢驗的過程為：

(1)、灌裝機升溫滅菌，將內表面接種有Bacillus subtilis ATCC 9372芽孢的包裝材料按照7.4s的速度通過灌裝機雙氧水槽，使包材在雙氧水槽中滅菌，滅菌后封合成包裝由排包口排出；所述包裝材料上的芽孢濃度為10^7CFU/包裝材料；

(2)、用無菌袋在排包口處收集200個殺菌后包裝樣品，其中包裝樣品不灌裝液體；

(3)、用無菌剪刀將接種處的包裝面剪下來，轉入新的無菌袋；

(6)、殺菌后或者陰性對照的包裝材料對應平板如果有枯草芽孢桿菌類菌落生長，對其菌落進行鑒定。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述無菌室無菌空氣沉降測試檢驗的過程為：

(1)、灌裝機管封結束后，在上部無菌室內平臺、后無菌室內部平臺、下部無菌室平臺各放入SDA和PCA平板中的一種；其中PCA平板接種有APC菌種，SDA平板接種有yeast和mold菌種；

(2)、灌裝機升溫干燥步驟結束后計時30分鐘打開無菌室門，立即蓋好平板利用封口膜對其進行封口，防止交叉污染；

(3)、陰性對照樣：將測試平板放置在無菌室外部檢測沉降菌，與PCA和SDA平板對比，排除開無菌室門過程中灌裝間沉降菌對無菌室平板造成的影響；

(4)、無菌環境測試平板和陰性對照將放在35攝氏度條件下培養2天；無菌環境測試平板和陰性對照將放在25攝氏度條件下培養5天；