[發明專利]CHO細胞株及其制備方法和使用該CHO細胞株制備豬圓環病毒2型Cap蛋白及其應用有效
| 申請號: | 201710602362.1 | 申請日: | 2017-07-21 |
| 公開(公告)號: | CN109280642B | 公開(公告)日: | 2022-07-22 |
| 發明(設計)人: | 錢泓;吳有強;卞廣林;張強;王娟;吳素芳;車影;宋月鴻;呂洋萍;聞雪;姜冰潔;賈寶琴;查銀河 | 申請(專利權)人: | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C12N5/10 | 分類號: | C12N5/10;C12N15/85;C07K14/01;G01N33/68;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司: | 北京乾誠五洲知識產權代理有限責任公司 11042 | 代理人: | 付曉青;李廣文 |
| 地址: | 312366 浙*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | cho 細胞株 及其 制備 方法 使用 圓環 病毒 cap 蛋白 應用 | ||
1.一種制備CHO細胞株的方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:
1)將SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表達載體中,以得到含有豬圓環病毒2型Cap蛋白編碼基因的重組質粒;所述真核表達載體為pEE12.4;
2)再將所述重組質粒轉染至CHO細胞中,以得到CHO細胞株;所述CHO細胞為CHO-K1細胞;以及
3)通過培養、通過MSX加壓篩選和單克隆篩選、懸浮馴化步驟2)中所述CHO細胞株,以得到高效分泌表達豬圓環病毒2型Cap蛋白的細胞株。
2.一種使用CHO細胞株制備豬圓環病毒2型Cap蛋白的方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:
1)將培養基CD-CHO和培養基Ex-cell 302混合,以得到混合培養基,其中,培養基CD-CHO和培養基Ex-cell 302的體積比為6:4;以及
2)將如權利要求1所述的高效分泌表達豬圓環病毒2型Cap蛋白的細胞株在所述混合培養基進行發酵培養,再通過純化得到重組豬圓環病毒2型Cap蛋白。
3.一種根據權利要求1所述的高效分泌表達豬圓環病毒2型Cap蛋白的細胞株在大規模制備豬圓環病毒2型Cap蛋白中的應用。
4.一種根據權利要求2所述的重組豬圓環病毒2型Cap蛋白在制備豬圓環病毒2型重組亞單位疫苗及相關診斷試劑中的應用。
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