[發明專利]固定化菌聯合多組分固體碳源小球及其制備方法

有效

• 申請號: 201710601603.0
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN109280658B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 余關龍;付永江;嚴曉江;彭海淵;陳宏;杜春艷
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/084;C12N11/02;C12R1/39
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 黃麗

1.一種固定化菌聯合多組分固體碳源小球的制備方法，包括以下步驟：

（1）谷殼預處理：將谷殼先進行水洗和烘干處理，然后打碎至1mm～2mm，置于堿溶液中加熱處理，再經水洗并浸泡后，采用酸溶液調節pH值至中性，烘干至恒重，得到預處理后的谷殼；

（2）將聚乙烯醇和海藻酸鈉加入水中，調節pH值至中性，加熱攪拌直至混合均勻，將所得混合液在室溫下放置，以冷卻和消除溶解過程中生成的氣泡，然后對混合液進行滅菌處理，再將步驟（1）預處理后的谷殼加入滅菌后的混合液中攪拌均勻，得到聚乙烯醇-海藻酸鈉-谷殼混合液；其中，聚乙烯醇∶海藻酸鈉∶預處理后的谷殼∶水的質量比為5～6∶0.5～2∶1～4∶100；

（3）將氯化錳和生長因子加入步驟（2）得到的聚乙烯醇-海藻酸鈉-谷殼混合液中，所述生長因子包括葉酸和D-泛酸，經攪拌后，得到多組分混合液；所述多組分混合液中，氯化錳的濃度為0.1mg/L，葉酸的濃度為0.2mg/L，D-泛酸的濃度為0.1mg/L；

（4）將含有反硝化細菌的菌懸液加入到步驟（3）的多組分混合液中攪拌均勻，然后將混合后的液體經注射裝置擠壓到CaCl₂溶液中，經交聯反應后，得到固定化菌聯合多組分固體碳源小球；

所述步驟（1）的谷殼預處理中：打碎后的谷殼與堿溶液的質量比為1∶30～50，所述堿溶液為NaOH溶液，所述NaOH溶液的質量分數為1%～3%，所述加熱的溫度為90℃，加熱的時間為1h～1.5h，所述酸溶液為鹽酸，所述鹽酸的濃度為0.1mol/L～0.5mol/L；

所述步驟（3）中，還包括將鉬酸鈉加入步驟（2）得到的聚乙烯醇-海藻酸鈉-谷殼混合液中，所得多組分混合液中鉬酸鈉的濃度為0.1mg/L。

2.根據權利要求1所述的固定化菌聯合多組分固體碳源小球的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述聚乙烯醇∶海藻酸鈉∶預處理后的谷殼∶水的質量比為6∶1∶3∶100。

3.根據權利要求1或2所述的固定化菌聯合多組分固體碳源小球的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中，所述反硝化細菌為熒光假單胞菌。

4.根據權利要求1或2所述的固定化菌聯合多組分固體碳源小球的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中，所述含有反硝化細菌的菌懸液由以下方法制備得到：將培養好的反硝化細菌的菌種培養液以4500r/min～6000r/min離心15min～25min，取離心沉淀懸濁液用磷酸緩沖溶液清洗，然后用生理鹽水清洗，離心后得到沉淀物菌體，取適量沉淀物菌體加蒸餾水，得到含有反硝化細菌的菌懸液。

5.一種如權利要求1～4中任一項所述的制備方法制得的固定化菌聯合多組分固體碳源小球。