[發明專利]光敏保護基保護的5-醛基胞嘧啶亞磷酰胺單體及其制備方法和寡聚核苷酸的合成和應用

有效

• 申請號: 201710600724.3
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107474091B
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 周傳政;席真;李鳳超;章映茜;白靜
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C07H19/073
• 分類號: C07H19/073;C07H1/00;C07H21/04;C07H21/00
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 嚴政;劉依云

1.一種光敏保護基保護的5-醛基胞嘧啶亞磷酰胺單體，其特征在于，其化學結構式為：

其中，R為甲基或苯基，“DMTrO-”為二甲氧基三苯甲基，“N(ⁱPr)₂-”為N,N-二異丙基胺基；

其中，所述光敏保護基為1-(2-硝基苯基)丙烷-1,3-二醇。

2.權利要求1所述的光敏保護基保護的5-醛基胞嘧啶亞磷酰胺單體的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)將3′,5′-(特丁基二甲基硅基)-5-醛基-2′-脫氧胞嘧啶、1-(2-硝基苯基)丙烷-1,3-二醇、原甲酸三乙酯和二氯甲烷進行第一混合后冷卻，形成第一混合溶液；再將所述第一混合溶液與四氯化鈦進行反應；然后將反應后得到的有機相洗滌、干燥、過濾、柱層析得到反應產物；

(2)將所述反應產物與四丁基氟化銨和四氫呋喃進行第二混合，形成第二混合溶液，然后將所述第二混合溶液旋蒸除去溶劑，柱層析得到5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶；

(3)將所述5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與三甲基氯硅烷、吡啶進行第三混合，形成第三混合溶液；再將所述第三混合溶液與乙酸酐進行反應；然后將反應后得到的有機相洗滌、干燥、過濾、柱層析得到4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶；

(4)將所述4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與4,4'-二甲氧基三苯基甲基氯、吡啶進行反應，然后將反應后得到的有機相洗滌、干燥、過濾、柱層析得到5′-(二甲氧基三苯甲基)-4-N-乙酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶；

(5)將所述5′-(二甲氧基三苯甲基)-4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與雙(二異丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦、1H-四唑和二氯甲烷進行反應，將反應后得到的溶液旋蒸除去溶劑，然后進行柱層析；

其中，在步驟(1)中，所述1-(2-硝基苯基)丙烷-1,3-二醇、所述3′,5′-(特丁基二甲基硅基)-5-醛基-2′-脫氧胞嘧啶、所述原甲酸三乙酯、所述二氯甲烷和所述四氯化鈦的用量的摩爾比為1mmol：(3-5)mmol:(1.2-1.5)mmol:(5-7)mL：(0.4-0.5)mmol；

所述第一混合的條件包括：溫度為18-25℃，時間為0.5-1小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘；

所述冷卻的條件包括：溫度為0-4℃，時間為0.1-0.5小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘；以及

所述四氯化鈦以滴加的方式加入所述第一混合溶液中，且步驟(1)所述的反應過程包括兩個階段，第一階段的反應條件包括：溫度為18-25℃，時間為5-7小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘，所述四氯化鈦的滴加速率為10滴/分鐘；以及第二階段的反應條件包括：溫度為18-25℃，時間為5-7小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘，所述四氯化鈦的滴加速率為15滴/分鐘；

其中，在步驟(2)中，所述3′,5′-(特丁基二甲基硅基)-5-醛基-2′-脫氧胞嘧啶、所述四丁基氟化銨和所述四氫呋喃的用量的比為1mmol:(3-4)mmol:(5-7)mL；以及

所述第二混合的條件包括：溫度為18-25℃，時間為9-11小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘；

其中，在步驟(3)中，所述5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與所述三甲基氯硅烷、所述吡啶和所述乙酸酐的用量的比為1mmol:(5-7)mmol:(9-11)mL：(1.1-1.3)mmol；以及

所述第三混合的條件包括：溫度為18-25℃，時間為1-2小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘；以及所述反應的條件包括：溫度為18-25℃，時間為3-5小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘；

其中，在步驟(4)中，所述4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與4,4'-二甲氧基三苯基甲基氯、吡啶的用量的比為1mmol:(1.5-2)mmol:(9-11)mL；以及

所述反應的條件包括：溫度為18-25℃，時間為12-18小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘；

其中，在步驟(5)中，所述5′-(二甲氧基三苯甲基)-4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與雙(二異丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦、1H-四唑和二氯甲烷的用量的比為1mmol:(1.3-1.6)mmol:(1.3-1.6)mmol:(10-30)mL；以及

所述反應的條件包括：溫度為18-25℃，時間為2-4小時，攪拌速度為250-500轉/分鐘。