[發(fā)明專利]一種分析柞蠶絲絲素蛋白中氨基酸徑向分布的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710599452.X | 申請日： | 2017-07-21 |
| 公開（公告）號： | CN107271689B | 公開（公告）日： | 2019-04-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王秉;陳茹茹;李津;梁軍龍;尚亞廷 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江理工大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 嘉興永航專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33265 | 代理人： | 江程鵬 |
| 地址： | 310018 浙江省杭*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 分析 柞蠶 絲絲 蛋白 氨基酸 徑向 分布 方法 | ||
本發(fā)明涉及蠶絲領(lǐng)域，公開了一種分析柞蠶絲絲素蛋白中氨基酸徑向分布的方法。本發(fā)明先采用堿法脫膠對柞蠶絲和進(jìn)行脫膠處理，得到絲素纖維，對絲素纖維進(jìn)行分組，然后分步采用不同蛋白酶對絲素纖維由外及內(nèi)依次進(jìn)行酶解，最后利用氨基酸分析對水解程度不同的殘余絲素中各種氨基酸的含量進(jìn)行測定，可以得到各氨基酸在柞蠶絲中的徑向分布。本發(fā)明根據(jù)柞蠶絲絲素纖維徑向上氨基酸分布的特點(diǎn)，采用多次酶解法對絲素蛋白進(jìn)行溶解，特異性高，作用條件溫和，對氨基酸的破壞小，使結(jié)果更準(zhǔn)確。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及蠶絲領(lǐng)域，尤其涉及一種分析柞蠶絲絲素蛋白中氨基酸徑向分布的方法。
背景技術(shù)
蠶絲是一種動物蛋白纖維材料，主要由絲素蛋白和絲膠蛋白組成，其中絲素蛋白約占70%，是蠶絲的主要成分，決定蠶絲的性質(zhì)和用途。柞蠶絲是生活中比較常見的蠶絲之一，其在各領(lǐng)域中都有實(shí)際應(yīng)用。
絲素基質(zhì)在蠶體內(nèi)的生化合成十分復(fù)雜，不同蠶絲腺內(nèi)的絲素蛋白原液不同，而且在吐絲過程中，絲素原液受到蠶體內(nèi)的壓力及口器的作用，會表現(xiàn)出不同的流變性，最終導(dǎo)致不同種類蠶絲絲素的分子結(jié)構(gòu)和超分子結(jié)構(gòu)等微結(jié)構(gòu)的不同。
桑蠶絲和柞蠶絲絲素蛋白中含有18種氨基酸（不含有20種基本氨基酸中的谷氨酰胺和天冬酰胺），主要由甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、絲氨酸（Ser）和酪氨酸（Tyr）組成。但兩者的氨基酸含量和分布差異較大，在柞蠶絲素中，具有活潑基團(tuán)的氨基酸（如精氨酸、天冬氨酸等）比桑蠶絲多，色氨酸、組氨酸的含量是桑蠶絲的5倍，柞蠶絲的丙氨酸含量為40%，桑蠶絲為30%。故柞蠶絲中肽鏈的彎曲和纏結(jié)程度比桑蠶絲大，這就使柞蠶絲的延伸度和彈性都高于桑蠶絲，柞蠶絲的吸濕性也遠(yuǎn)大于桑蠶絲，其抗紫外線的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于桑蠶絲。為分析柞蠶絲在加工和服用的優(yōu)異性質(zhì)，有必要對柞蠶絲絲素中氨基酸的徑向分布和變化規(guī)律進(jìn)行研究。
目前，在研究過程中，可通過使用酸、堿溶液或各種蛋白酶對絲素蛋白進(jìn)行不同程度（通過控制水解/酶解時間的長短來實(shí)現(xiàn)徑向上的逐層侵蝕）的溶解，以得到殘余的絲素纖維，再采用紅外光譜、X射線衍射等技術(shù)進(jìn)行分析。但上述溶解方法容易損傷氨基酸，并且容易對絲素纖維內(nèi)層暫時不希望被水解的蛋白質(zhì)造成誤水解/酶解，從而造成分析結(jié)果不夠準(zhǔn)確。此外，上述方法還無法進(jìn)行較詳細(xì)的定量研究。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種分析柞蠶絲絲素蛋白中氨基酸徑向分布的方法。本發(fā)明根據(jù)柞蠶絲絲素纖維徑向上氨基酸分布的特點(diǎn)，采用多次酶解法對絲素蛋白進(jìn)行溶解，特異性高，作用條件溫和，對氨基酸的破壞小，使結(jié)果更準(zhǔn)確。
本發(fā)明的具體技術(shù)方案為：1.一種分析柞蠶絲絲素蛋白中氨基酸徑向分布的方法，其特征在于包括以下步驟：
1）稱取柞蠶絲作為樣品，用去離子水清洗，去除表面污染物，烘干。
2）將烘干的樣品以1:95-105的浴比在含有0.4-0.6wt% Na2PO4和0.8-1.2wt%C17H35COONa的混合溶液中煮沸25-35min，進(jìn)行脫膠處理，共脫膠兩次。
本發(fā)明在脫膠過程中，加入C17H35COONa緩沖劑，提高脫膠效率，同時減少對絲素纖維的傷害。
3）脫膠之后，將樣品用去離子水沖洗干凈，放入55-65℃烘箱，得到干燥的絲素纖維。
4）取直徑相近的絲素纖維，等質(zhì)量分為A、B、C、D、E五組，其中A組作為對照組，不做任何處理。
5）將B、C、D、E組浸入到組織蛋白酶溶液中進(jìn)行酶解，反應(yīng)完成后，對酶進(jìn)行滅活處理，保留B組殘余絲素。
6）將步驟5）酶解過的C、D、E組浸入到胃蛋白酶溶液中進(jìn)行酶解，反應(yīng)完成后，對酶進(jìn)行滅活處理，保留C組殘余絲素。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于浙江理工大學(xué)，未經(jīng)浙江理工大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201710599452.X/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
