[發(fā)明專利]單組分TMB底物濃縮液及其制備方法與應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107449902B
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張浩
• 申請（專利權(quán)）人: 張浩
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

本發(fā)明提供了單組分TMB底物濃縮液及其制備方法與應(yīng)用，每1ml所述濃縮液中：甘油0.1ml,聚乙烯甘醇2000(PEG2000)0.1g,二甲基亞砜(DMSO)0.1ml,TMB 0.013g,β?環(huán)糊精0.02g,乙二胺四乙酸(EDTA)0.0024g,檸檬水0.02g,過氧化氫0.22％，已丙醇0.05ml,反丁烯二酸0.01g,其余為去離子水，所述濃縮液pH值為3.6±0.2，通過混合方式獲得，具有極高的穩(wěn)定性和TMB的溶解度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子技術(shù)領(lǐng)域，尤其是單組分TMB底物濃縮液及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

TMB的中文名稱為3,3’,5,5’–四甲基對二氨基聯(lián)苯，是一種新型安全的色原試劑；TMB已在逐步取代強(qiáng)致癌物聯(lián)苯胺和其他致癌性的聯(lián)苯胺衍生物，應(yīng)用于臨床化驗(yàn)、法醫(yī)檢驗(yàn)、刑事偵破及環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域；尤其是在臨床生化檢驗(yàn)方面，TMB作為過氧化酶的新底物，在酶免疫分析法(EIA)和酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法(ELISA)中獲得了廣泛的應(yīng)用。TMB作為與過氧化物酶一起進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定的底物，其作用機(jī)理在幾十年前就已經(jīng)確立，阻止TMB被氧化以及形成沉淀的方法也早就得到了闡明。

隨著在酶聯(lián)抗體檢測和免疫診療中以TMB為底物、辣根過氧化物酶(HRP)為活性物的免疫測定中TMB被得到廣泛應(yīng)用，TMB已成為廣泛接受的良好的過氧化物底物酶，TMB的需求量也與日劇增。然而使用濃度的TMB底物濃度較小，體積龐大，為TMB的運(yùn)輸造成極大不便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種單組分TMB底物濃縮液。

本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述單組分TMB底物濃縮液的制備方法。

本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述單組分TMB底物濃縮液的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：

一種單組分TMB底物濃縮液，每1ml濃縮液中：甘油0.1ml,聚乙烯甘醇2000(PEG2000)0.1g,二甲基亞砜(DMSO)0.1ml,TMB 0.013g,β-環(huán)糊精0.02g,乙二胺四乙酸(EDTA)0.0024g,檸檬水0.02g,過氧化氫0.22％，已丙醇0.05ml,反丁烯二酸0.01g,其余為去離子水，所述濃縮液pH值為3.6±0.2。

優(yōu)選的，上述單組分TMB底物濃縮液，所述去離子水為電阻18MΩ的去離子水。

上述單組分TMB底物濃縮液為濃縮20倍的TMB溶液。

上述單組分TMB底物濃縮液的制備方法，具體步驟如下：

(1)按組方量準(zhǔn)備如下組分：甘油、聚乙烯甘醇2000、二甲基亞砜、TMB、β-環(huán)糊精、乙二胺四乙酸、檸檬酸、過氧化氫、異丙醇、反丁烯二酸和去離子水；

(2)配置β-環(huán)糊精：將β-環(huán)糊精加入部分去離子水中，攪拌至完全溶解；

(3)繼續(xù)加入除DMSO、TMB和H₂O₂外的其他全部剩余試劑；

(4)在不斷攪拌下將TMB加入到DMSO中；

(5)將步驟(4)中溶液、H₂O₂與步驟(3)中溶液混合，最終混合溶液包含組方中所有的化學(xué)試劑，調(diào)節(jié)混合溶液的pH值至3.6±0.2；

(6)繼續(xù)加入剩余去離子水進(jìn)行補(bǔ)足，所得到的TMB濃縮液在40-50℃條件下攪拌直至所有化學(xué)物質(zhì)全部溶解，即得。

優(yōu)選的，上述單組分TMB底物濃縮液的制備方法，所述步驟(5)中用于條件pH值的溶液為鹽酸溶液。

上述單組分TMB底物濃縮液在檢測辣根過氧化物酶方面的應(yīng)用。