[發明專利]一種焦磷酸測序法檢測腸促胰素作用相關的單核苷酸多態性的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201710598976.7
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN108949940A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 施愛明;錢晨月;鮑君杰
• 申請（專利權）人: 蘇州大學附屬第二醫院
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/6883
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 汪青;周敏

1.一種焦磷酸測序法檢測腸促胰素作用相關基因的單核苷酸多態性的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒包括用于測定多態性位點rs3765467的上游引物、下游引物和測序引物，用于測定多態性位點rs10423928的上游引物、下游引物和測序引物，用于測定多態性位點rs7903146的上游引物、下游引物和測序引物，用于測定多態性位點rs4664443的上游引物、下游引物和測序引物，用于測定多態性位點rs12617656的上游引物、下游引物和測序引物，其中：

所述的多態性位點rs3765467的上游引物序列為：CCCGCCTCAACTCACTCTTTC，下游引物序列為：ACGTGTACCGGTTCTGCACAG，測序引物序列為：GCGAGGAGTCCAAGC；

所述的多態性位點rs10423928的上游引物序列為：GGGGAAAATACTAGTCTCAGTGGA，下游引物序列為：GGTTCTTGGCTGTATTCCTGTGA，測序引物序列為：GCTGAATTTAATGAATGAAC；

所述的多態性位點rs7903146的上游引物序列為：TGGGCTTTCTCTGCCTCAAAAC，下游引物序列為：ACTTGCCTTCCCTGTAACTGTGGT，測序引物序列為：AGCTAAGCACTTTTTAGAT；

所述的多態性位點rs4664443的上游引物序列為：TGAATCACCCGAGGAAGCG，下游引物序列為：TCTCATCCCACCCATTCCTCTC，測序引物序列為：TCACCCGAGGAAGCG；

所述的多態性位點rs12617656的上游引物序列為：TGAGCTATTATCATGCTGGTTTCA，下游引物序列為：TAGCGAGTTTGGGGTTAAGAAG，測序引物序列為：CAGTAAATGTGTGGCAGA。

2.根據權利要求1所述的焦磷酸測序法檢測腸促胰素作用相關基因的單核苷酸多態性的試劑盒，其特征在于：所述的多態性位點rs3765467的上游引物或下游引物采用生物素標記；

所述的多態性位點rs10423928的上游引物或下游引物采用生物素標記；

所述的多態性位點rs7903146的上游引物或下游引物采用生物素標記；

所述的多態性位點rs4664443的上游引物或下游引物采用生物素標記；

所述的多態性位點rs12617656的上游引物或下游引物采用生物素標記。

3.根據權利要求2所述的焦磷酸測序法檢測腸促胰素作用相關基因的單核苷酸多態性的試劑盒，其特征在于：所述的多態性位點rs3765467的上游引物的5’端采用生物素標記；

所述的多態性位點rs10423928的上游引物的5’端采用生物素標記；

所述的多態性位點rs7903146的下游引物的5’端采用生物素標記；

所述的多態性位點rs4664443的下游引物的5’端采用生物素標記；

所述的多態性位點rs12617656的上游引物的5’端采用生物素標記。

4.一種應用權利要求1至3中任一項所述的試劑盒檢測腸促胰素作用相關基因的單核苷酸多態性的方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟(1)、提取模板DNA；

步驟(2)、采用PCR擴增試劑盒以及所述的多態性位點rs3765467的上游引物、下游引物，所述的多態性位點rs10423928的上游引物、下游引物，所述的多態性位點rs7903146的上游引物、下游引物，所述的多態性位點rs4664443的上游引物、下游引物，所述的多態性位點rs12617656的上游引物、下游引物對步驟(1)提取的模板DNA進行PCR擴增；

步驟(3)、通過焦磷酸測序法以及采用所述的多態性位點rs3765467的測序引物，所述的多態性位點rs10423928的測序引物，所述的多態性位點rs7903146的測序引物，所述的多態性位點rs4664443的測序引物，所述的多態性位點rs12617656的測序引物對步驟(2)的PCR擴增產物進行測序。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述的PCR擴增試劑盒采用TaKaRa ExHot Start Version。