[發明專利]CpG復合佐劑在MUC1融合蛋白抗腫瘤中的用途

在審

• 申請號: 201710598431.6
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107158375A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 臺桂香
• 申請（專利權）人: 臺桂香
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司22100
• 代理人: 陳宏偉

技術領域：

本發明提供一種CpG復合佐劑在MUC1融合蛋白抗腫瘤中的用途，涉及CpG-ODN 2006與MF59聯合作為免疫佐劑在重組MUC1-MBP融合蛋白抗腫瘤中的醫用用途，屬于免疫學治療領域。

背景技術：

CpG-ODN是人工合成的含有非甲基化胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸(CpG)的寡脫氧核苷酸(ODN)，可模擬細菌DNA刺激B細胞、樹突狀細胞活化，間接激活NK和T細胞等多種免疫效應細胞，增強抗原提呈細胞的加工和提呈，誘導Th1型免疫應答，產生較強的體液免疫和細胞免疫應答，可用于腫瘤治療、過敏性疾病、感染性疾病、免疫功能低下者。目前公認的對人免疫刺激活性最強是CpG-ODN 2006。國外已經對CpG-ODN 2006進行了多項臨床試驗，包括對黑色素瘤、肺小細胞癌、皮膚T細胞淋巴瘤，證實是高效低毒的新型免疫佐劑。國內沃森生物將CpG-ODN作為乙型肝炎疫苗佐劑，目前正在進行臨床III期實驗，而國內目前尚未發現用于腫瘤疫苗佐劑的報道。

MF59是將Span 85(0.5％，V/V),Tween 80(0.5％，V/V)，角鯊烯(4.3％，V/V)混和乳化制得的水包油乳劑，1997年作為流感疫苗佐劑在歐盟獲批上市。因其誘導體液免疫反應的效果更好，常被用于人類流感疫苗。但近年，已有研究者通過向疫苗制劑中添加病原相關分子模式(PAMP)的模擬物來改變MF59的免疫特點，并證實MF59聯合其它佐劑確實可以通過某些機制向利于腫瘤免疫的Th1方向發展。這為MF59在其他領域存在潛在應用價值提供了一定的理論基礎。

MUC1是Mucins粘蛋白家族的重要成員，存在于正常腺管上皮細胞及其來源的腫瘤細胞表面，由多肽核芯(核芯肽)和側枝糖鏈構成。由于正常組織MUC1與腫瘤組織不同，使其成為免疫細胞攻擊的靶點。經反復動物實驗以及部分人體實驗研究證實，MUC1是腫瘤疫苗研制的有效靶點。目前以MUC1為靶點研制的腫瘤疫苗，49個處于臨床試驗階段，其中，TG4010和Tecemotide也已經完成III期臨床并取得良好的結果。本研究組長期以來以MUC1為靶點，首次通過基因工程技術將MUC1基因與大腸桿菌麥芽糖結合蛋白偶聯制成重組MUC1-MBP融合蛋白。研究發現重組MUC1-MBP融合蛋白單獨免疫小鼠，很難產生強烈的細胞免疫應答；而與CpG-ODN 2006聯合免疫，既能產生特異性體液免疫應答，又能產生的細胞免疫應答；尤其是當CpG-ODN 2006與MF59聯合后，能更加顯著協同增強重組MUC1-MBP融合蛋白誘導的特異性細胞免疫應答，發揮更加顯著的抗腫瘤作用。

發明內容：

本發明提供了一種CpG復合佐劑在MUC1融合蛋白抗腫瘤中的用途，用于人類治療或預防腫瘤。

所述的CpG復合佐劑為CpG-ODN與MF59聯合復合佐劑，其中，CpG-ODN 2006，序列是：5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3'，也稱CpG-ODN 7909，是一種非甲基化胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸為核心的序列。MF59是將Span 85(0.5％，V/V),Tween 80(0.5％，V/V)，角鯊烯(4.3％，V/V)混和乳化制得的水包油乳劑。

本發明涉及CPG-ODN 2006與MF59以及MUC1-MBP聯合適用于下述醫療用途：

1.CPG-ODN 2006與MF59作為重組MUC1-MBP融合蛋白佐劑，三者聯合作為治療性疫苗，治療癌癥包括表達MUC1的腺癌、肝癌、血液腫瘤等。

2.CPG-ODN 2006與MF59作為重組MUC1-MBP融合蛋白佐劑，三者聯合作為預防性疫苗，應用于各種表達MUC1的各種癌癥的預防，包括表達MUC1的腺癌、肝癌、血液腫瘤等。

本發明所述的CpG-ODN 2006與MF59復合佐劑的制備工藝，包括以下步驟：

1、將Span 85、Tween 80、角鯊烯和10nM檸檬酸鈉分別按照體積比0.5％、0.5％、4.3％和94.7％進行混合，用乳化機乳化10min，變成乳白色勻質狀，制成MF59乳劑；

2、采用冷凍離心機離心，6000rpm離心5min不發生分層，即達到乳化標準.

3、經0.22μm濾膜過濾除菌，備用；

4、將CpG-ODN 2006按照2mg/ml溶于水中，與MF59乳劑按照1:2體積比進行混合制成復合佐劑。