[發(fā)明專利]一種ARR3基因T239C、C298T和C893A位點(diǎn)的檢測(cè)引物組、試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710598012.2
• 申請(qǐng)日: 2017-07-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107385036B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張清炯;肖學(xué)珊;黎仕強(qiáng);賈小云;郭向明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)中山眼科中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發(fā)明公開(kāi)了一種ARR3基因T239C、C298T和C893A位點(diǎn)的檢測(cè)引物組、試劑盒及應(yīng)用。本發(fā)明基于Sanger測(cè)序的原理，具有高度的敏感性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性的特點(diǎn)，可以同時(shí)檢測(cè)ARR3基因三個(gè)致高度近視的突變位點(diǎn)，用于高度近視的早期篩查、輔助診斷，為患者實(shí)施早期預(yù)防和治療提供依據(jù)，具有良好的市場(chǎng)應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種ARR3基因T239C、C298T和C893A位點(diǎn)的檢測(cè)引物組、試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

近視是危害視力的常見(jiàn)原因，其中，高度近視(屈光度在-6.00D以上的近視)并發(fā)癥(青光眼、白內(nèi)障、玻璃體混濁、視網(wǎng)膜脫離等)是致盲的第二大原因；中國(guó)人的近視患病率遠(yuǎn)高于其他種族，且終身受累。更嚴(yán)峻的是，隨著城市化的推進(jìn)和生活方式的轉(zhuǎn)變，近視的發(fā)病率還在逐年增高，居住于經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)的亞洲人群尤甚。大量證據(jù)表明高度近視與遺傳密切相關(guān)，家族遺傳性高度近視，尤其是學(xué)齡前已有的早發(fā)高度近視，受環(huán)境因素影響小，大多由基因突變所致，這類患者近視度數(shù)進(jìn)行性增加，眼底視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病變逐年加重，且代代相傳，給患者帶來(lái)沉重的心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。如果對(duì)這類高度近視患者進(jìn)行致病基因突變檢測(cè)，是其早期診斷和防治的基礎(chǔ)。

目前已有的對(duì)早發(fā)性高度近視的致病基因檢測(cè)試劑盒，僅有ZNF644基因的六個(gè)致病位點(diǎn)的檢測(cè)(CN102732607A)，但是這六個(gè)致病位點(diǎn)僅在很少數(shù)病人中檢測(cè)到，而絕大多數(shù)的早發(fā)性高度近視患者的致病突變不明，還需要對(duì)更多的致病基因進(jìn)行突變檢測(cè)。因此找到更多可導(dǎo)致早發(fā)性高度近視的突變位點(diǎn)并開(kāi)發(fā)成檢測(cè)試劑盒，將對(duì)早發(fā)性高度近視的精準(zhǔn)診療具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)的ARR3基因T239C、C298T和C893A位點(diǎn)的檢測(cè)引物組、試劑盒及應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種ARR3基因T239C、C298T和C893A位點(diǎn)的檢測(cè)引物組，所述的檢測(cè)引物組如下所示：

針對(duì)ARR3基因T239C和C298T位點(diǎn)：

ARR3-1F：5’-GCCAGCCTTCGATCATATTACAT-3’(如SEQ ID NO.1所示)；

ARR3-1R：5’-TGGCGATGAGGCTGTGGAGGTTA-3’(如SEQ ID NO.2所示)；

針對(duì)ARR3基因C893A位點(diǎn)：

ARR3-2F：5’-AGGATTTCCCACCAGAACTAAT-3’(如SEQ ID NO.3所示)；

ARR3-2R：5’-GGCTTTACTGAACATGAAACCT-3’(如SEQ ID NO.4所示)。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種ARR3基因T239C和C298T位點(diǎn)和/或C893A位點(diǎn)的檢測(cè)試劑盒，包括上述的針對(duì)ARR3基因T239C和C298T位點(diǎn)的上下游引物和/或針對(duì)ARR3基因C893A位點(diǎn)的上下游引物。

優(yōu)選，所述的檢測(cè)試劑盒還包括2*Master Mix、ddH₂O、陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。

優(yōu)選，所述的陽(yáng)性質(zhì)控品包括含有SEQ ID NO.5所示序列的質(zhì)粒DNA、含有SEQ IDNO.6所示序列的質(zhì)粒DNA和含有SEQ ID NO.7所示序列的質(zhì)粒DNA。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種ARR3基因T239C、C298T和C893A位點(diǎn)的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

(1)提取待測(cè)樣品的基因組DNA；

(2)分別以上述的針對(duì)ARR3基因T239C和C298T位點(diǎn)的上下游引物和針對(duì)ARR3基因C893A位點(diǎn)的上下游引物對(duì)步驟(1)提取的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；