[發(fā)明專利]一種檢測雌激素敏感性易感基因的檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710597500.1
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN107177695A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蒙敏;潘加奎;肖飛
• 申請（專利權(quán)）人: 解碼（上海）生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體涉及一種雌激素敏感性易感基因檢測試劑盒，根據(jù)檢測結(jié)果從基因水平評估雌激素敏感性的級別，并作為預(yù)防和治療更年期綜合征的方向指導(dǎo)。

背景技術(shù)

女性更年期綜合征是女性卵巢功能逐漸衰退至完全消失的過渡時期，女性更年期綜合征多發(fā)生于40-60歲多間，由于生理和心理改變而出現(xiàn)的一系列臨床癥狀，常見有烘熱汗出、煩躁易怒、心悸失眠或憂郁健忘等。

在生育期卵巢周期性產(chǎn)生雌激素和孕激素，雌孕激素協(xié)同作用，維持女性健康生理。女性40歲后，卵巢功能逐漸衰退，直至絕經(jīng)。雌激素水平明顯下降導(dǎo)致婦女身心功能異常，產(chǎn)生潮熱、出汗等一系列癥狀，統(tǒng)稱更年期綜合征。對存在雌激素缺乏的絕經(jīng)后婦女補充雌激素及孕激素以緩解其更年期癥狀的治療為雌激素替代治療。在治療過程中，有的女性對雌激素敏感，運用雌激素替代療法治療更年期綜合征過程中容易雌激素補充過量。而長期的雌激素過量會誘發(fā)乳腺癌。因此檢測雌激素敏感性意義重大。

最近的研究表明，雌激素敏感性的發(fā)生與ER-α、CYP17基因密切相關(guān)。ER-α基因編碼雌激素受體，與雌激素結(jié)合，可導(dǎo)致正常乳腺上皮細(xì)胞增生，而增生細(xì)胞比靜止期細(xì)胞對致癌物更敏感，提示雌激素是一種腫瘤促進劑，它能刺激乳腺癌細(xì)胞在體內(nèi)生長增殖。研究表明，約60-70％的乳腺癌是雌激素依賴性腫瘤。ER-α基因c.453-397T＞C、c.453-351A＞G基因突變，ER-α水平上調(diào)，促進轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)表達，對雌激素敏感，從而促進乳腺癌發(fā)生。

CYP17基因編碼細(xì)胞色素P45017A1，同時具有17α-羥化酶、17，20-裂解酶的活性，在類固醇性激素合成的途徑中起關(guān)鍵作用。在17α-羥化酶活性和17，20側(cè)鏈裂解酶活性都不存在的情況下，孕烯醇酮向合成鹽皮質(zhì)激素方向轉(zhuǎn)化；如果只有17α-羥化酶活性發(fā)揮作用，孕烯醇酮向糖皮質(zhì)激素方向轉(zhuǎn)化；當(dāng)17α-羥化酶和17，20側(cè)鏈裂解酶同時具有活性時，孕烯醇酮可向性激素方向轉(zhuǎn)化。CYP17基因c.-34T＞C突變，導(dǎo)致17α-羥化酶和17，20-裂解酶活性增強，提高雌激素和性激素的合成水平，過度刺激靶器官，增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險。

綜上所述，鑒于ER-α、CYP17基因與雌激素敏感性有著重要的關(guān)聯(lián)關(guān)系，可以做為預(yù)測和篩查雌激素敏感人群的潛在指征，通過這些雌激素敏感性易感基因的檢測，能在預(yù)防因雌激素敏感導(dǎo)致雌激素替代療法誘發(fā)乳腺癌方面起到不容忽視的重要作用，為更年期女性使用雌激素替代療法提供個體化治療輔助依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明基于ER-α基因上單核苷酸多態(tài)性位點c.453-397T＞C(rs2234693)、c.453-351A＞G(rs9340799)，CYP17基因上單核苷酸多態(tài)性位點c.-34T＞C(rs743572)基因型可作為評估雌激素敏感的危險因子的基礎(chǔ)上，研制一種雌激素敏感性易感基因檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測ER-α基因上單核苷酸多態(tài)性位點c.453-397T＞C(rs2234693)、c.453-351A＞G(rs9340799)，CYP17基因上單核苷酸多態(tài)性位點c.-34T＞C(rs743572)的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應(yīng)組件(包括Taq酶、dNTP混合液、反應(yīng)緩沖液、ddH2O等)；

PCR產(chǎn)物純化組件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA測序反應(yīng)組件(包括BigDyemix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應(yīng)體系：10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5ul；25mMdNTP混合液0.2ul；5U/ulTaqDNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對(每條引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR產(chǎn)物純化體系：1U/ulSAP酶0.75ul；10U/ulExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。

測序反應(yīng)體系：25％BigDyemix1ul；3.2uMDNA測序引物1ul；125mMEDTA溶液1ul；100％乙醇溶液15ul；70％乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O2ul。

本試劑盒供一人份檢測應(yīng)用，試劑盒的保存溫度為-20℃。

具體實施方式