[發明專利]南極磷蝦貯藏過程中導致其品質劣化的優勢菌群確定方法

有效

• 申請號: 201710597123.1
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN107338296B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 王芳;徐甲坤;陳怡炫;惠彥行
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/04;G16B40/30;G16B45/00;G16B25/00;G16B20/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種南極磷蝦貯藏過程中導致其品質劣化的優勢菌群確定方法，屬于食品領域。所述方法使用高通量測序法從不同溫度貯藏條件下分析南極磷蝦中微生物多樣性，確定導致其品質劣化的優勢菌群。為南極磷蝦相關的食品加工條件提供參考依據。本發明方法檢測南極磷蝦樣品中的微生物多樣性和豐度均顯著高于平板培養方法。

技術領域

本發明屬于食品領域，具體地涉及一種南極磷蝦貯藏過程中導致其品質劣化的優勢菌群確定方法

背景技術

南極磷蝦因其巨大的生物量、潛在的漁業資源以及在南極生態系統中的特殊地位而日益受到人們的關注。南極磷蝦含有營養價值極其豐富的蛋白質、磷脂、不飽和脂肪酸等成分，在水產加工領域有著廣泛的應用前景。受船舶條件、裝備以及加工技術等的限制，目前中國作業船捕撈的南極磷蝦原料，很大一部分在船上進行凍結、保藏，之后運輸到陸地進行二次加工。在此過程中，南極磷蝦在微生物和自身蛋白酶的作用下容易發生自溶，黑化，嚴重影響了南極磷蝦的品質。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于提供一種南極磷蝦貯藏過程中導致其品質劣化的優勢菌群的確定方法，所述方法考察了南極磷蝦在不同溫度(A：0℃；B：4℃；C：16℃；D：25℃)貯藏條件下的微生物多樣性，確定了導致其品質劣化的優勢菌群，為南極磷蝦加工的質量控制及后期的保鮮技術奠定了基礎。

本發明是通過如下技術方案來實現的

一種南極磷蝦貯藏過程中導致其品質劣化的優勢菌群確定方法，所述方法包括如下步驟：

從-80℃取出南極磷蝦樣品，解凍后用無菌水沖洗磷蝦表面，然后分別置于0℃、4℃、16℃和25℃培養箱；24h后進行高通量測序；

首先提取樣品總DNA，分別用細菌引物V3/V4和真菌引物ITS1/ITS2擴增，獲得條帶后上機測序；Miseq測序序列中含有barcode序列，以及測序時加入的引物和接頭序列；首先需要去除引物接頭序列，再根據PE reads之間的overlap關系，將成對的reads拼接成一條序列，然后按照barcode標簽序列識別并區分樣品得到各樣本數據，最后對各樣本數據的質量進行質控過濾，得到各樣本有效數據。在OTU聚類結果的基礎上，獲取每一個OTU聚類中的代表性序列；計算ACE/Chao/Shannon/Simpson/Coverage等物種多樣性指數，并制作所有樣品ACE/Chao/Shannon/Simpson/Richness指數的箱形圖；基于物種分類分析，繪制物種分類條形圖，物種豐度餅圖，物種豐度熱圖；根據對已有測序微生物基因組的基因功能的構成分析結果和測序獲得的物種構成，推測樣本中的功能分類的構成；根據功能分類豐度，繪制功能分類條形圖、豐度熱圖、豐度柱狀圖、豐度聚類樹圖。

進一步，所述的細菌引物V3-V4

序列F：CCTACGGGNGGCWGCAG；序列R：GACTACHVGGGTATCTAATCC。所述的真菌引物ITS1-ITS2序列F：CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA；序列R：GCTGCGTTCTTCATCGATGC。

本發明與現有技術相比的有益效果

本發明從不同溫度(A：0℃；B：4℃；C：16℃；D：25℃)貯藏條件下分析南極磷蝦中微生物多樣性，確定導致其品質劣化的優勢菌群。為南極磷蝦相關的食品加工條件提供參考依據。

本發明使用高通量測序的檢測南極磷蝦樣品中的微生物多樣性和豐度均顯著高于平板培養方法。

附圖說明

圖1是細菌多樣性chao指數箱形圖A：0℃(24h)；B：4℃(24h)；C：16℃(24h)；D：25℃(24h)；

圖2是細菌多樣性Simpson指數箱形圖A：0℃(24h)；B：4℃(24h)；C：16℃(24h)；D：25℃(24h)；