[發明專利]一種高效石斑魚精子冷凍保存液及其使用方法

有效

• 申請號: 201710596134.8
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN107183014B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 田永勝;唐江;陳張帆;李振通;成美玲
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 邵新華

本發明公開了一種高效石斑魚精子冷凍保存液及其使用方法，屬于魚類種質冷凍保存的技術領域。本發明包括稀釋液和抗凍劑；所述稀釋液為水溶液，所述稀釋液中含有以下質量濃度的組分：葡萄糖10～20g/L、氯化鈉7.5～8.5g/L、氯化鉀0.6～0.7g/L；所述抗凍劑為1,2?丙二醇，所述抗凍劑在所述保存液中的體積濃度為10～20％。本發明還給出上述保存液保存石斑魚精子的使用方法，經過稀釋液配制、抗凍劑配制、保存液預冷、精液稀釋、平衡和分裝、冷凍保存、解凍和受精七個步驟而完成。本發明的保存液成份簡單，毒性低，易于配制，養殖技術人員容易掌握，冷凍活力高，具有廣泛的通用性，提高了石斑魚精子冷凍保存成活率。

技術領域

本發明屬于魚類種質保存的技術領域，特別是指一種高效石斑魚精子冷凍保存液及其使用方法。

背景技術

石斑魚(Epinephelus)是我國重要的海水養殖經濟魚類和優良種質資源，在我國有36種石斑魚，主要分布在東海和南海。2015年石斑魚捕撈量達117593噸，養殖量達100006噸，對于藍色農業發展具有重要的作用。由于石斑魚是一類雌雄同體、雌性先熟的魚類，在同一生態群體中雄性數量相當少，在石斑魚的人工繁殖中很難獲得雄魚的精子；另一方面隨著石斑魚產業的迅速發展，以及養殖品種出現病害多、畸形率高等問題，養殖企業急需培育出具有優良養殖性狀的新品種來提高養殖產量和效益。建立石斑魚精子庫可以將分布于不同地域、不同繁殖時間的各種石斑魚種質冷凍保存起來，利用不同品種在生長、抗病等方面的性狀進行遠緣雜交育種，培育生產中急需的養殖新品種，因此研究石斑魚精子冷凍保存技術具有重要的意義。

石斑魚種繁多，例如：鞍帶石斑魚、七帶石斑魚、云紋石斑魚、棕點石斑魚、褐石斑魚、金錢石斑魚、清水石斑魚等，每一種魚在生態分布、生理和繁殖習性等方面都具有各自的特點，不同魚類精子生理特點也不同，因此，在石斑魚精子冷凍保存中需要針對性的研制各種精子稀釋液和冷凍劑。目前，現有的石斑魚精子冷凍保存液只能用于特定的、單一石斑魚品種精子的冷凍保存，冷凍保存精子活力較低，活力平均在65％左右，不具有廣普性，通用性差；而且，精子稀釋液成份比較復雜，成本較高，養殖企業的一般技術人員難于掌握，往往在配制和精子冷凍保存中出現誤差，導致冷凍精子的成活率較低，給石斑魚精子冷凍保存及精子冷凍庫的建立增加了實際困難。

發明內容

本發明的目的是提供一種高效石斑魚精子冷凍保存液及其使用方法，解決了現有技術中石斑魚精子冷凍保存液存在通用性差、成分復雜和成活率低的問題。

本發明的一種高效石斑魚精子冷凍保存液，其主要是通過以下技術方案加以實現的：包括稀釋液和抗凍劑；所述稀釋液為水溶液，所述稀釋液中含有以下質量濃度的組分：葡萄糖10～20g/L、氯化鈉7.5～8.5g/L、氯化鉀0.6～0.7g/L；所述抗凍劑為1,2-丙二醇，所述抗凍劑在所述保存液中的體積濃度為10～20％。

本發明的石斑魚精子冷凍保存液具有成份簡單、毒性低、易于配制和冷凍活力高的特點，解決了現有石斑魚精子冷凍保存液成份多、毒性高、配制和保存方法復雜，養殖技術人員難于掌握的問題；本發明的石斑魚精子冷凍保存液具有廣泛的通用性，可以廣泛用于鞍帶石斑魚、七帶石斑魚、云紋石斑魚、棕點石斑魚、褐石斑魚、金錢石斑魚和清水石斑魚等各類石斑魚的精子冷凍保存，提高了石斑魚精子冷凍保存成活率；本發明的精子冷凍保存液使用了毒性較低的1,2-丙二醇(PG)，極大降低了對精子細胞結構和遺傳物質的損傷，提高了冷凍精子的成活率和受精率，也可降低對操作人員的傷害及對養殖環境的污染，達到了環保作用，為石斑魚精子冷凍庫的建立提供了一種高效的技術方法。

作為一種優選的實施方案，所述稀釋液中含有以下質量濃度的組分：葡萄糖15g/L、氯化鈉8g/L、氯化鉀0.65g/L。本發明的稀釋液含有三種物質，其成份少，濃度適宜，配制方便，不會對精子的細胞結構和遺傳物質造成損傷，廣泛用于各類石斑魚精子的冷凍保存，提高了冷凍精子的成活率和受精率。