[發明專利]血液中維生素A的檢測方法

在審

• 申請號: 201710595403.9
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN107356693A
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: 萬哲見
• 申請（專利權）人: 成都和合醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司32243
• 代理人: 胡定華

技術領域

本發明屬于血液檢測技術領域，具體涉及一種血液中維生素A的檢測方法。

背景技術

維生素是人體生長和代謝所必需的微量營養物質，人體攝入過量時會出現皮膚干燥、脫屑和脫發等癥狀，攝入不足時會出現夜盲癥、干眼病等癥狀，因此血液檢測中測定維生素A是非常必需的。目前常用的維生素A檢測方法主要為免疫分析法、高效液相色譜法和超高效液相色譜-質譜法等，由于免疫分析法所用的抗體可以識別其他維生素衍生物，故檢測的可靠性不是很高，而色譜法雖然檢測精度得到很大提高，但其由于其特異性差，過程繁瑣，用時也比較長。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種能有效縮短操作時間，并確保檢測精度的血液中維生素A的檢測方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：

血液中維生素A的檢測方法，包括以下步驟：

（1）采集血液樣本，加入甲醇和乙腈混合溶液，置于漩渦混合器內漩渦混合20-45s，然后室溫高速離心2-3min，取上清液至樣品瓶中，氮氣吹干后復溶于70v％甲醇水溶液中，均分成4-8個待測樣本，每個待測樣本為60-90μL；

（2）將待測樣本分別進行超高效液相色譜法測定，色譜條件為：色譜柱：Hilic柱，柱溫：38-42℃，待測樣品溫度：10-15℃，流速：0.25-0.32mL/min，流動相：含0.1v％甲酸銨的甲醇水溶液，等度洗脫；

（3）將待測樣本分別繼續進行質譜法測定，串聯質譜條件為：離子源：電噴霧離子源ESI，正離子模式，監測方式：反應監測模式，毛細管電壓：4-4.2kV，去溶劑溫度：510-520℃，霧化氣壓：60-65kPa。

所述步驟（1）中血液樣本與混合溶液的體積比為1:0.5-0.75，混合溶液中甲醇和乙腈的體積比為1:0.8-1。

所述步驟（2）中含0.1v％甲酸銨的甲醇水溶液，其甲醇的含量為80-90 v％。

本發明的有益效果是：本發明的檢測方法通過對傳統超高效液相色譜-質譜法的改進，降低了操作的繁瑣性，檢測時間縮短至4min以內，且具有較好的特異性，能夠有效確保對血液中維生素A的檢測精度。

具體實施方式：

以下結合實施例對本發明做進一步詳細說明，但這些實施例并不是對本發明的限定。

實施例1

血液中維生素A的檢測方法，包括以下步驟：

（1）采集血液樣本，加入甲醇和乙腈混合溶液，置于漩渦混合器內漩渦混合20s，然后室溫高速離心2min，取上清液至樣品瓶中，氮氣吹干后復溶于70v％甲醇水溶液中，均分成6個待測樣本，每個待測樣本為70μL；其中：血液樣本與混合溶液的體積比為1:0.5，混合溶液中甲醇和乙腈的體積比為1:0.8；

（2）將待測樣本分別進行超高效液相色譜法測定，色譜條件為：色譜柱：Hilic柱，柱溫：38℃，待測樣品溫度：10℃，流速：0.25mL/min，流動相：含0.1v％甲酸銨的甲醇水溶液，等度洗脫；甲醇水溶液中甲醇的含量為80 v％；

（3）將待測樣本分別繼續進行質譜法測定，串聯質譜條件為：離子源：電噴霧離子源ESI，正離子模式，監測方式：反應監測模式，毛細管電壓：4kV，去溶劑溫度：510℃，霧化氣壓：60kPa。

實施例2

血液中維生素A的檢測方法，包括以下步驟：

（1）采集血液樣本，加入甲醇和乙腈混合溶液，置于漩渦混合器內漩渦混合30s，然后室溫高速離心3min，取上清液至樣品瓶中，氮氣吹干后復溶于70v％甲醇水溶液中，均分成8個待測樣本，每個待測樣本為60μL；其中：血液樣本與混合溶液的體積比為1:0.6，混合溶液中甲醇和乙腈的體積比為1:0.8；

（2）將待測樣本分別進行超高效液相色譜法測定，色譜條件為：色譜柱：Hilic柱，柱溫：40℃，待測樣品溫度：15℃，流速：0.28mL/min，流動相：含0.1v％甲酸銨的甲醇水溶液，等度洗脫；甲醇水溶液中甲醇的含量為80 v％；

（3）將待測樣本分別繼續進行質譜法測定，串聯質譜條件為：離子源：電噴霧離子源ESI，正離子模式，監測方式：反應監測模式，毛細管電壓：4.2kV，去溶劑溫度：520℃，霧化氣壓：65kPa。

實施例3

血液中維生素A的檢測方法，包括以下步驟：