[發(fā)明專利]一種基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710595281.3
• 申請(qǐng)日: 2017-07-20
• 公開（公告）號(hào): CN107164316A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅茜;夏偉光;鄭春田;陳偉;何靜怡;董春琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12N5/075
• 分類號(hào): C12N5/075
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、選取鴨胚的卵巢組織4-6個(gè)，將卵巢組織置于滅菌PBS中，將卵巢組織剪碎；

步驟2、在剪碎的卵巢組織碎片中加入10ml混合酶消化液，將卵巢組織碎片和混合酶消化液置于細(xì)口消化瓶中，并放置在搖床上進(jìn)行消化處理；

步驟3、用移液槍吹打卵巢組織碎片，加入胎牛血清終止消化，用細(xì)胞篩網(wǎng)過濾；

步驟4、收集濾液，并進(jìn)行離心處理；棄濾液，在沉淀的細(xì)胞中加細(xì)胞培養(yǎng)基，移液器輕柔吹打20-30次，使細(xì)胞懸浮，將細(xì)胞懸浮液鋪板培養(yǎng)皿；分離提取得到基于鴨胚的卵母細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟1中的鴨胚的胚齡為24-26天。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟2中的混合酶消化液的配比為每10ml中含有3-5mg膠原蛋白酶Ⅱ、3-5mg蛋白酶和3-5mg透明質(zhì)酸酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟2中的消化時(shí)間為45-60min，消化溫度為37℃，消化轉(zhuǎn)速為170-190r/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟3中的胎牛血清的體積濃度為10％，細(xì)胞篩網(wǎng)的目數(shù)為200目。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟4中的離心轉(zhuǎn)速為1000-1500r/min，離心時(shí)間為3-4min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鴨胚的卵母細(xì)胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟4中的細(xì)胞懸浮液按照1×10⁴cell/ml濃度鋪板培養(yǎng)皿。