[發明專利]一種基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法在審
| 申請號: | 201710595281.3 | 申請日: | 2017-07-20 |
| 公開(公告)號: | CN107164316A | 公開(公告)日: | 2017-09-15 |
| 發明(設計)人: | 羅茜;夏偉光;鄭春田;陳偉;何靜怡;董春琳 | 申請(專利權)人: | 廣東省農業科學院動物科學研究所 |
| 主分類號: | C12N5/075 | 分類號: | C12N5/075 |
| 代理公司: | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350 | 代理人: | 湯東鳳 |
| 地址: | 510640 廣東*** | 國省代碼: | 廣東;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 基于 細胞 分離 提取 方法 | ||
1.一種基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟1、選取鴨胚的卵巢組織4-6個,將卵巢組織置于滅菌PBS中,將卵巢組織剪碎;
步驟2、在剪碎的卵巢組織碎片中加入10ml混合酶消化液,將卵巢組織碎片和混合酶消化液置于細口消化瓶中,并放置在搖床上進行消化處理;
步驟3、用移液槍吹打卵巢組織碎片,加入胎牛血清終止消化,用細胞篩網過濾;
步驟4、收集濾液,并進行離心處理;棄濾液,在沉淀的細胞中加細胞培養基,移液器輕柔吹打20-30次,使細胞懸浮,將細胞懸浮液鋪板培養皿;分離提取得到基于鴨胚的卵母細胞。
2.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法,其特征在于,所述步驟1中的鴨胚的胚齡為24-26天。
3.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法,其特征在于,所述步驟2中的混合酶消化液的配比為每10ml中含有3-5mg膠原蛋白酶Ⅱ、3-5mg蛋白酶和3-5mg透明質酸酶。
4.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法,其特征在于,所述步驟2中的消化時間為45-60min,消化溫度為37℃,消化轉速為170-190r/min。
5.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法,其特征在于,所述步驟3中的胎牛血清的體積濃度為10%,細胞篩網的目數為200目。
6.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法,其特征在于,所述步驟4中的離心轉速為1000-1500r/min,離心時間為3-4min。
7.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法,其特征在于,所述步驟4中的細胞懸浮液按照1×104cell/ml濃度鋪板培養皿。
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