[發明專利]一種基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法在審
| 申請號： | 201710595281.3 | 申請日： | 2017-07-20 |
| 公開（公告）號： | CN107164316A | 公開（公告）日： | 2017-09-15 |
| 發明（設計）人： | 羅茜;夏偉光;鄭春田;陳偉;何靜怡;董春琳 | 申請（專利權）人： | 廣東省農業科學院動物科學研究所 |
| 主分類號： | C12N5/075 | 分類號： | C12N5/075 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 510640 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 細胞 分離 提取 方法 | ||
1.一種基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1、選取鴨胚的卵巢組織4-6個，將卵巢組織置于滅菌PBS中，將卵巢組織剪碎；
步驟2、在剪碎的卵巢組織碎片中加入10ml混合酶消化液，將卵巢組織碎片和混合酶消化液置于細口消化瓶中，并放置在搖床上進行消化處理；
步驟3、用移液槍吹打卵巢組織碎片，加入胎牛血清終止消化，用細胞篩網過濾；
步驟4、收集濾液，并進行離心處理；棄濾液，在沉淀的細胞中加細胞培養基，移液器輕柔吹打20-30次，使細胞懸浮，將細胞懸浮液鋪板培養皿；分離提取得到基于鴨胚的卵母細胞。
2.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟1中的鴨胚的胚齡為24-26天。
3.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟2中的混合酶消化液的配比為每10ml中含有3-5mg膠原蛋白酶Ⅱ、3-5mg蛋白酶和3-5mg透明質酸酶。
4.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟2中的消化時間為45-60min，消化溫度為37℃，消化轉速為170-190r/min。
5.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟3中的胎牛血清的體積濃度為10％，細胞篩網的目數為200目。
6.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟4中的離心轉速為1000-1500r/min，離心時間為3-4min。
7.根據權利要求1所述的基于鴨胚的卵母細胞的分離提取方法，其特征在于，所述步驟4中的細胞懸浮液按照1×104cell/ml濃度鋪板培養皿。
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