[發明專利]一種產磷脂酶D的重組大腸桿菌及其應用有效
| 申請號： | 201710594567.X | 申請日： | 2017-07-20 |
| 公開（公告）號： | CN107384844B | 公開（公告）日： | 2019-11-08 |
| 發明（設計）人： | 劉立明;秦雯;吳承晉;華嘉偉 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N9/16;C12N15/70;C12P13/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 磷脂酰絲氨酸 重組大腸桿菌 磷脂酶D 生物工程技術領域 分子生物學手段 卡那霉素抗性 生二素鏈霉菌 磷脂酶D基因 磷脂酰膽堿 重組磷脂酶 表達載體 表達質粒 高效生產 平板篩選 時空產率 維生素C 高拷貝 含磷酸 磷酸酯 酶工程 絲氨酸 構建 應用 克隆 轉化 生產 | ||
1.一種高產磷脂酶D的基因工程菌，其特征在于，以大腸桿菌為宿主，表達磷脂酶D；所述磷脂酶D的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述磷脂酶D由pET28a(+)為載體進行表達，編碼所述磷脂酶D的基因序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌包括E.coli BL21、E.coli JM109、E.coli DH5α或E.coli TOP10。
3.一種構建權利要求1所述高產磷脂酶D的基因工程菌的方法，其特征在于，將編碼磷脂酶D的基因與載體連接，在宿主大腸桿菌中重組表達。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述載體為pET28a(+)，所述大腸桿菌為E.coli BL21(DE3)。
5.一種重組磷脂酶D的制備方法，其特征在于，將權利要求1所述的基因工程菌培養至OD600為0.6-1.0，以IPTG為誘導劑，表達磷脂酶D。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，將權利要求1所述的基因工程菌培養至OD600為0.6-1.0，加入終濃度為0.4～0.6mM IPTG，于25～28℃誘導1～4h。
7.一種生產磷脂酰絲氨酸的方法，其特征在于，所述方法是以大豆卵磷脂和L-絲氨酸為底物，應用權利要求1所述的基因工程菌轉化底物生產磷脂酰絲氨酸。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述轉化體系是：大豆卵磷脂濃度為0.1～0.4mol，L-絲氨酸濃度為0.5～2.0mol，轉化條件為：pH 4～9，轉化溫度30～60℃，轉化時間2～8h。
9.權利要求1所述的基因工程菌在制備含磷脂酰絲氨酸的食品、藥品或保健品中的應用。
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