[發明專利]一種寨卡病毒NS1抗原突變體及其應用

有效

• 申請號: 201710594232.8
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN107188935B
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 尹午山;王軒
• 申請（專利權）人: 北京健乃喜生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;C12N15/40;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/569;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 北京金闕華進專利事務所(普通合伙) 11224
• 代理人: 吳鴻維

本發明提供一種寨卡病毒NS1抗原突變體及其應用，通過對寨卡病毒NS1抗原及登革病毒四個型別NS1抗原氨基酸序列的比對分析，找出同源性極高的部分，進行基因水平的敲除突變，基因合成，載體構建，原核表達，抗原純化及免疫學功能性分析，篩選到既不影響寨卡檢測的靈敏度又能顯著降低登革陽性樣本的檢出率，即降低了寨卡病毒與登革病毒抗體檢測的交叉。

技術領域

本發明屬于分子生物學及生物信息學技術領域，并涉及了基因工程及免疫學的內容，具體地，涉及寨卡病毒抗原及其應用。

背景技術

寨卡病毒屬黃病毒科，黃病毒屬，單股正鏈RNA病毒，直徑20nm，是一種通過蚊蟲進行傳播的蟲媒病毒，宿主不明確，主要在野生靈長類動物和棲息在樹上的蚊子，如非洲伊蚊(Aedes aegypti)中循環。該病毒最早于1947年偶然通過黃熱病監測網絡在烏干達寨卡叢林的恒河猴中發現，隨后于1952年在烏干達和坦桑尼亞人群中發現。該病毒活動一直比較隱匿，僅在赤道周圍的非洲、美洲、亞洲和太平洋地區有寨卡病毒感染散發病例。最早一次暴發流行是2007年發生在西太平洋密克羅尼亞群島的雅鋪島，更大的一次流行于2013年-2014年發生在大洋洲的法屬波利尼西亞，感染了約32000人。伊蚊還傳播黃病毒科中的其他種類病毒，其中就包括了登革熱病毒，如何做到寨卡和登革兩種疾病的區別檢測，降低登革患者血清在寨卡診斷中的交叉對寨卡病毒抗體檢測試劑的有效性具有重要意義。

寨卡病毒感染的典型癥狀包括急性起病的低熱、斑丘疹、關節疼痛(主要累及手、足小關節)、結膜炎，其他癥狀包括肌痛、頭痛、眼眶痛及無力。另外少見的癥狀包括腹痛、惡心、嘔吐、黏膜潰瘍和皮膚瘙癢。2013年和2015年分別在法屬波利尼西亞和巴西塞卡疫情期間，有報道稱寨卡病毒病可能會造成神經和自身免疫系統并發癥。2015年巴西的寨卡暴發流行中發現了很多小頭畸形(microcephaly)的新生兒。寨卡病毒經由母親傳染給孩子，寨卡發燒可能和新生嬰兒的小頭畸形有關連，其對成人的感染能影響神經系統，而且可能也與格林－巴利綜合征(Guillain-Barre syndrome)存在聯系。

寨卡病毒呈球形，直徑約為40-70nm，有包膜。ZIKV核酸為一條長度為10,794堿基的單正鏈RNA，其編碼基因順序為5’-C-prM-E-NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5-3’。RNA翻譯為一個多聚蛋白，然后通過蛋白酶裂解為結構蛋白衣殼蛋白(capsid，C)、前體膜蛋白(precursor membrane，prM)、膜蛋白(envelope，E)，以及7個非結構蛋白(nonstructuralprotein,NS)。其中NS1是一個具有多重功能的非結構蛋白。該蛋白結構在黃病毒科中高度保守。

寨卡病毒NS1蛋白由三個結構區組成：N端β-roll,C端β-ladder，和翼區(wingdomain)。NS1蛋白通常以二聚體和六聚體的形式存在。二聚體NS1在病毒基因組的復制過程中起著重要作用。六聚體NS1能幫助病毒逃避宿主免疫細胞的識別。

參考文獻：

1.Xu X,Song H,Qi J,Liu Y,Wang H,Su C,Shi Y,Gao GF.Contribution ofinterwined loop to membrane association revealed by Zika virus full-lengthNS1 structure.EMBO J.2016 Oct 17；35(20):2170-2178.