[發明專利]一種檢測心肌梗死的試劑及其應用

在審

• 申請號: 201710592593.9
• 申請日: 2017-07-19
• 公開（公告）號: CN107164550A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 李曙光;孫錦云
• 申請（專利權）人: 北京泱深生物信息技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及疾病診斷領域，具體涉及一種檢測心肌梗死的試劑及其應用，更具體的涉及一種檢測miR-520c的試劑及其在制備診斷心肌梗死試劑中的應用。

背景技術

急性心肌梗死(AMI)是指急性心肌缺血性壞死，大多是在冠脈病變的基礎上發生冠脈血供應急劇減少或中斷，使得相應的心肌嚴重而持久的急性缺血所致。急性心肌梗死是最嚴重的一種心血管疾病，近十年來我國心肌梗死發病率呈明顯上升趨勢，早期、準確的診斷可以保證再灌注治療的立即開始可能減少死亡率。然而，目前診斷都是基于臨床癥狀、心電圖異常和生化指標，但大約1/3的AMI病人早期臨床癥狀不典型，約1/2的病人心電圖不能出現特征性ST段改變，常用的生化指標中如肌酸激酶、乳酸脫氫酶、肌紅蛋白等由于他們的特異性或敏感性等原因，在臨床應用中受到一些限制。從目前的趨勢看，隨著醫學科研的發展，心肌梗死的血液生化指標已經從以酶活為主的檢查發展到以基因或蛋白濃度的檢測。另外，分子標志物的聯合使用可使各種標志物互為補充，彌補單一標志物的某些不足，臨床的精準診斷和治療需要更多候選分子標志物。

本發明基于高通量測序方法，獲得心肌梗死miRNA的表達數據，同時，結合GEO數據庫中心肌梗死相關miRNA數據，進行生物信息學分析驗證，從候選的miRNA中挑選出miR-520c和miR-1274b進行分子生物學驗證，結果顯示，miR-520c和miR-1274b與心肌梗死密切相關。可單獨或合并用于心肌梗死的臨床診斷及預防檢測，為臨床上相關診斷試劑研發奠定基礎。

發明內容

一種檢測心肌梗死的試劑，所述試劑檢測miR-520c的表達水平。

所述miR-520c的序列見序列表SEQ ID NO 1。

進一步，試劑還檢測miR-1274b的表達水平。

所述miR-1274b的序列見序列表SEQ ID NO 2。

進一步，檢測心肌梗死試劑包括基于高通量測序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探針雜交方法檢測樣本中miR-520c和/或miR-1274b。

優選采用northern雜交方法、miRNA表達譜芯片、核酶保護分析技術、RAKE法、原位雜交、基于微球的流式細胞術檢測樣本中miR-520c和/或miR-1274b的轉錄。

所述樣本為外周血。

優選的，基于定量PCR方法包括特異性擴增miR-520c和/或miR-1274b的引物，進一步優選，特異性擴增miR-520c的引物序列為SEQ ID NO 3，特異性擴增miR-1274b的引物序列為SEQ ID NO 4；基于探針雜交方法包括與miR-520c和/或miR-1274b的核酸序列雜交的探針。

進一步，所述miRNA為miR-520c的前體，前體序列為SEQ ID NO 5。

進一步，樣本中miR-520c和/或miR-1274b高表達顯示患心肌梗死風險增加。

優選的，試劑檢測miR-520c和/或miR-1274b的表達水平。

檢測miRNA的制劑在制備診斷心肌梗死試劑中的應用，所述miRNA選自下列中的一種或幾種：miR-520c、miR-1274b。

本發明的目的在于提供下調miR-520c和/或miR-1274b的轉錄和/或抑制miR-520c和/或miR-1274b的活性的試劑在制備防治心肌梗死制劑中的應用。

優選的，采用反義寡核苷酸、antagomiRs、miRNA海綿、miRNA Erasers、Target Masking和/或多靶點反義寡核苷酸的方法下調miR-520c和/或miR-1274b的轉錄和/或阻斷miR-520c和/或miR-1274b的活性。

本發明的目的在于提供檢測miR-520c和/或miR-1274b的靶基因制劑在制備診斷心肌梗死制劑中的應用。

定義：

現階段檢測miRNA的表達水平的方法主要包括基于高通量測序技術、基于核苷酸雜交和基于PCR的miRNA檢測方法。基于探針雜交技術的miRNA檢測方法是一種直接檢測法，不需要對樣本RNA進行預擴增，包括northern雜交方法、miRNA表達譜芯片、核酶保護分析技術、RAKE法、原位雜交、基于微球的流式細胞術等技術。

(1)Northern雜交