[發(fā)明專利]一種檢測(cè)心肌梗死的試劑及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710592593.9
• 申請(qǐng)日: 2017-07-19
• 公開（公告）號(hào): CN107164550A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李曙光;孫錦云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京泱深生物信息技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病診斷領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)心肌梗死的試劑及其應(yīng)用，更具體的涉及一種檢測(cè)miR-520c的試劑及其在制備診斷心肌梗死試劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

急性心肌梗死(AMI)是指急性心肌缺血性壞死，大多是在冠脈病變的基礎(chǔ)上發(fā)生冠脈血供應(yīng)急劇減少或中斷，使得相應(yīng)的心肌嚴(yán)重而持久的急性缺血所致。急性心肌梗死是最嚴(yán)重的一種心血管疾病，近十年來(lái)我國(guó)心肌梗死發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，早期、準(zhǔn)確的診斷可以保證再灌注治療的立即開始可能減少死亡率。然而，目前診斷都是基于臨床癥狀、心電圖異常和生化指標(biāo)，但大約1/3的AMI病人早期臨床癥狀不典型，約1/2的病人心電圖不能出現(xiàn)特征性ST段改變，常用的生化指標(biāo)中如肌酸激酶、乳酸脫氫酶、肌紅蛋白等由于他們的特異性或敏感性等原因，在臨床應(yīng)用中受到一些限制。從目前的趨勢(shì)看，隨著醫(yī)學(xué)科研的發(fā)展，心肌梗死的血液生化指標(biāo)已經(jīng)從以酶活為主的檢查發(fā)展到以基因或蛋白濃度的檢測(cè)。另外，分子標(biāo)志物的聯(lián)合使用可使各種標(biāo)志物互為補(bǔ)充，彌補(bǔ)單一標(biāo)志物的某些不足，臨床的精準(zhǔn)診斷和治療需要更多候選分子標(biāo)志物。

本發(fā)明基于高通量測(cè)序方法，獲得心肌梗死m(xù)iRNA的表達(dá)數(shù)據(jù)，同時(shí)，結(jié)合GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中心肌梗死相關(guān)miRNA數(shù)據(jù)，進(jìn)行生物信息學(xué)分析驗(yàn)證，從候選的miRNA中挑選出miR-520c和miR-1274b進(jìn)行分子生物學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果顯示，miR-520c和miR-1274b與心肌梗死密切相關(guān)。可單獨(dú)或合并用于心肌梗死的臨床診斷及預(yù)防檢測(cè)，為臨床上相關(guān)診斷試劑研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

一種檢測(cè)心肌梗死的試劑，所述試劑檢測(cè)miR-520c的表達(dá)水平。

所述miR-520c的序列見(jiàn)序列表SEQ ID NO 1。

進(jìn)一步，試劑還檢測(cè)miR-1274b的表達(dá)水平。

所述miR-1274b的序列見(jiàn)序列表SEQ ID NO 2。

進(jìn)一步，檢測(cè)心肌梗死試劑包括基于高通量測(cè)序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探針雜交方法檢測(cè)樣本中miR-520c和/或miR-1274b。

優(yōu)選采用northern雜交方法、miRNA表達(dá)譜芯片、核酶保護(hù)分析技術(shù)、RAKE法、原位雜交、基于微球的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本中miR-520c和/或miR-1274b的轉(zhuǎn)錄。

所述樣本為外周血。

優(yōu)選的，基于定量PCR方法包括特異性擴(kuò)增miR-520c和/或miR-1274b的引物，進(jìn)一步優(yōu)選，特異性擴(kuò)增miR-520c的引物序列為SEQ ID NO 3，特異性擴(kuò)增miR-1274b的引物序列為SEQ ID NO 4；基于探針雜交方法包括與miR-520c和/或miR-1274b的核酸序列雜交的探針。

進(jìn)一步，所述miRNA為miR-520c的前體，前體序列為SEQ ID NO 5。

進(jìn)一步，樣本中miR-520c和/或miR-1274b高表達(dá)顯示患心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)增加。

優(yōu)選的，試劑檢測(cè)miR-520c和/或miR-1274b的表達(dá)水平。

檢測(cè)miRNA的制劑在制備診斷心肌梗死試劑中的應(yīng)用，所述miRNA選自下列中的一種或幾種：miR-520c、miR-1274b。

本發(fā)明的目的在于提供下調(diào)miR-520c和/或miR-1274b的轉(zhuǎn)錄和/或抑制miR-520c和/或miR-1274b的活性的試劑在制備防治心肌梗死制劑中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，采用反義寡核苷酸、antagomiRs、miRNA海綿、miRNA Erasers、Target Masking和/或多靶點(diǎn)反義寡核苷酸的方法下調(diào)miR-520c和/或miR-1274b的轉(zhuǎn)錄和/或阻斷miR-520c和/或miR-1274b的活性。

本發(fā)明的目的在于提供檢測(cè)miR-520c和/或miR-1274b的靶基因制劑在制備診斷心肌梗死制劑中的應(yīng)用。

定義：

現(xiàn)階段檢測(cè)miRNA的表達(dá)水平的方法主要包括基于高通量測(cè)序技術(shù)、基于核苷酸雜交和基于PCR的miRNA檢測(cè)方法。基于探針雜交技術(shù)的miRNA檢測(cè)方法是一種直接檢測(cè)法，不需要對(duì)樣本RNA進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增，包括northern雜交方法、miRNA表達(dá)譜芯片、核酶保護(hù)分析技術(shù)、RAKE法、原位雜交、基于微球的流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)。

(1)Northern雜交