[發明專利]一種可檢測6種養殖魚類細菌性疾病的抗體芯片在審
| 申請號： | 201710592395.2 | 申請日： | 2017-07-19 |
| 公開（公告）號： | CN107238703A | 公開（公告）日： | 2017-10-10 |
| 發明（設計）人： | 陳劍桃 | 申請（專利權）人： | 陳劍桃 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京高航知識產權代理有限公司11530 | 代理人： | 趙永強 |
| 地址： | 543100 廣西壯族自*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 養殖 魚類 細菌 性疾病 抗體 芯片 | ||
1.一種可檢測6種養殖魚類細菌性疾病的抗體芯片，其特征在于，包括把6種魚類細菌性疾病的抗體以及6種魚類細菌性疾病的混合抗體以微陣列的形式，微陣列布局為8行×6列，均勻固定在固相載體表面，制備獲得抗體芯片。
2.根據權利要求1所述的可檢測6種養殖魚類細菌性疾病的抗體芯片，其特征在于，所述細菌性病菌的病原菌包括哈維弧菌、嗜水氣單胞菌、柱狀屈撓桿菌、遲緩愛德華氏菌、海分支桿菌和熒光假單胞菌。
3.根據權利要求2所述的可檢測6種養殖魚類細菌性疾病的抗體芯片，其特征在于，所述固相載體包括玻璃片、硅片、硝酸纖維素膜、PVDF膜和云母片。
4.一種權利要求1所述的抗體芯片的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、固相載體的預處理；
S2、哈維弧菌、嗜水氣單胞菌、柱狀屈撓桿菌、遲緩愛德華氏菌、海分支桿菌和熒光假單胞菌抗血清進行純化，使用辣根過氧化物酶標試劑盒對抗體進行標記；標記后的抗體進行混合；
S3、使用pH7.0～8.0的20～30％的PBS緩沖液稀釋純化后的血清進行稀釋，稀釋濃度為0.1～3mg/mL，4℃保存備用；
S4、室溫下，使用微陣列芯片點樣儀進行點樣，設置陽性對照和陰性對照點，點樣完成后，25～28℃固定3～5h，4℃保存備用。
5.一種權利要求1所述的抗體芯片的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)、將已點樣的載體從4℃取出，置于室溫平衡20min，PBS洗滌3次，每次3～5min；室溫晾干；
(2)使用PBS配置1％的脫脂奶粉或者BSA，將上述的固相載體置于其中封閉，室溫，振蕩110rpm，1h；
(3)PBS-T洗滌3次，每次5～10min；室溫甩干；
(4)室溫晾干后，向載體上的點分別滴加一系列濃度梯度的病原菌懸液和病原菌混合液，37℃，反應1～2h；
(5)PBS-T洗滌3次，每次5～10min；室溫甩干；
(6)向載體上的點分別滴加標記的抗體，37℃孵育1-2h；
(7)PBS-T洗滌3次，每次5～10min，加TMB避光發色20min，使用1mol/L硫酸終止反應，去離子水漂洗5次，室溫甩干；
(8)掃描儀掃描，記錄實驗結果。
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