[發(fā)明專(zhuān)利]miRNA、組合物及其在診斷疾病中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710591401.2
• 申請(qǐng)日: 2017-07-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107164546A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李曙光;孫錦云
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京泱深生物信息技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;A61K45/00;A61P9/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病診斷領(lǐng)域，具體涉及miRNA、組合物及其在診斷疾病中的應(yīng)用，更具體的涉及miR-942-5p、miR-1262及他們的組合物在診斷心肌梗死中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

近期研究表明，miRNA參與30％-50％基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)調(diào)控，在心血管系統(tǒng)的生理和病理機(jī)制中都發(fā)揮非常重要的作用。現(xiàn)有報(bào)道顯示miRNA參與了心血管重塑的不同病理過(guò)程中，包括心肌肥大、纖維化、心肌功能改變以及血管新生等，由于miRNA的變化早于基因和蛋白的改變，亦早于疾病癥狀的出現(xiàn)，由此檢測(cè)miRNA的動(dòng)態(tài)變化，有可能為疾病的發(fā)生、發(fā)展提供線索，進(jìn)而指導(dǎo)臨床早期干預(yù)，有效控制疾病發(fā)展。急性心肌梗死(AMI)是最嚴(yán)重的一種心血管疾病，早期、準(zhǔn)確的診斷可以保證再灌注治療的立即開(kāi)始可能減少死亡率。一些生物標(biāo)志物如心肌肌鈣蛋白I已應(yīng)用與診斷AMI，可提高目前診斷，為急性心肌梗死的新方法。以往的研究表明miR-30a是與心肌肥厚相關(guān)，可作為診斷急性心肌梗死生物標(biāo)志物的潛在臨床價(jià)值，但是這些還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，臨床的精準(zhǔn)診斷和治療需要更多候選分子標(biāo)志物。

本發(fā)明基于高通量測(cè)序方法，獲得心肌梗死m(xù)iRNA的表達(dá)數(shù)據(jù)，同時(shí)，結(jié)合GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中心肌梗死相關(guān)miRNA數(shù)據(jù)，進(jìn)行生物信息學(xué)分析驗(yàn)證，從候選的miRNA中挑選出miR-942-5p和miR-1262進(jìn)行分子生物學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果顯示，miR-942-5p和miR-1262與心肌梗死密切相關(guān)。可單獨(dú)或合并用于心肌梗死的臨床診斷及預(yù)防檢測(cè)，為臨床上相關(guān)診斷試劑研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

檢測(cè)miRNA的制劑在制備診斷心肌梗死試劑中的應(yīng)用，所述miRNA選自下列中的一種或幾種：miR-942-5p、miR-1262。

所述miR-942-5p的序列見(jiàn)序列表SEQ ID NO 1。

所述miR-1262的序列見(jiàn)序列表SEQ ID NO 2。

優(yōu)選的，聯(lián)合檢測(cè)miR-942-5p和miR-1262的制劑在制備診斷心肌梗死試劑中的應(yīng)用。

進(jìn)一步，診斷心肌梗死試劑包括基于高通量測(cè)序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探針雜交方法檢測(cè)樣本中miR-942-5p和/或miR-1262。

優(yōu)選采用northern雜交方法、miRNA表達(dá)譜芯片、核酶保護(hù)分析技術(shù)、RAKE法、原位雜交、基于微球的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本中miR-942-5p和/或miR-1262的轉(zhuǎn)錄。

所述的樣本為外周血。

進(jìn)一步，樣本中miR-942-5p和/或miR-1262高表達(dá)顯示患心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)增加。

優(yōu)選的，基于定量PCR方法包括特異性擴(kuò)增miR-942-5p和/或miR-1262的引物，進(jìn)一步優(yōu)選，特異性擴(kuò)增miR-942-5p的引物序列為SEQ ID NO 3，特異性擴(kuò)增miR-1262的引物序列為SEQ ID NO 4；基于探針雜交方法包括與miR-942-5p和/或miR-1262的核酸序列雜交的探針。

進(jìn)一步，所述miRNA為miR-942-5p和/或miR-1262的前體，前體序列為SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6。

本發(fā)明的目的在于提供下調(diào)miR-942-5p和/或miR-1262的轉(zhuǎn)錄和/或抑制miR-942-5p和/或miR-1262的活性的試劑在制備防治心肌梗死制劑中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，采用反義寡核苷酸、antagomiRs、miRNA海綿、miRNA Erasers、Target Masking和/或多靶點(diǎn)反義寡核苷酸的方法下調(diào)miR-942-5p和/或miR-1262的轉(zhuǎn)錄和/或阻斷miR-942-5p和/或miR-1262的活性。

本發(fā)明的目的在于提供檢測(cè)miR-942-5p和/或miR-1262的靶基因制劑在制備診斷心肌梗死制劑中的應(yīng)用。

所述靶基因?yàn)镈IANA-MICROT、MICRORNA.ORG、MIRDB、RNA22-HAS、TARGETMINER、TARGETSCAN-VERT數(shù)據(jù)庫(kù)表明miR-942-5p和/或miR-1262的靶基因。

定義：

現(xiàn)階段檢測(cè)miRNA的表達(dá)水平的方法主要包括基于高通量測(cè)序技術(shù)、基于核苷酸雜交和基于PCR的miRNA檢測(cè)方法。基于探針雜交技術(shù)的miRNA檢測(cè)方法是一種直接檢測(cè)法，不需要對(duì)樣本RNA進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增，包括northern雜交方法、miRNA表達(dá)譜芯片、核酶保護(hù)分析技術(shù)、RAKE法、原位雜交、基于微球的流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)。

(1)Northern雜交