[發明專利]利用分子標記對3種草莓品種進行快速鑒別的方法

有效

• 申請號: 201710590228.4
• 申請日: 2017-07-19
• 公開（公告）號: CN107190089B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 陳堅;朱炳耀;郭文杰;鄭益平;楊志敏;莊志鴻
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明屬于生物技術領域，具體提供一種利用分子標記對3種草莓品種進行快速鑒別的方法。由于草莓在植株與果實形態上直接鑒別的難度較大，即采用分子標記中的SSR標記法對已在本地區范圍內推廣種植的草莓品種進行指紋圖譜的比較，快速鑒別出品種。本發明主要包括提取草莓的總DNA，篩選SSR引物，通過對不同草莓樣品的PCR擴增，僅用3對SSR引物鑒別出與對照品種形成顯著條帶差異的品種，擴增結果可有效地用于篩選不同于在本地區長期種植的傳統品種的引進品種，以達到保護品種知識產權的目的。

技術領域

本發明屬于園藝育種領域與分子生物學領域，更具體涉及一種利用分子標記對3種草莓品種進行快速鑒別的方法。

技術背景

我國是世界草莓種植大國，產量和種植面積都位居世界第一，目前生產使用的品種多是歐美和日韓的品種，對產量高，抗性強，商品性好的品種需求旺盛。福建省的寧德地區是我國東南區域草莓的主產區，但當地的大規模主栽品種是早年從歐美引進的法蘭地和甜查理，此外，也種植有從外省引進的如紅顏、紅寶等品種。本發明于2010年首次從美國和北京等地引進一系列品種，通過小區試驗篩選出了3個中日性的草莓品種紫莓1號、紫莓3號和太空1號，適應在福建沿海半促成栽培和露地栽培，與我省主栽培品種法蘭地比較，具有產量高，抗白粉病，黃萎病，紅蜘蛛，硬度大，果型美觀，貨架期長等特點，值得進一步研究推廣。本項目組自2012年起，3個品種陸續提供給寧德蕉城、霞浦、連江、閩侯、惠安、漳州、漳浦、連城等地種植示范推廣。通過在寧德的蕉城虎貝鄉、洋中鎮際頭村組建草莓苗育種及過渡馴化基地，使得新品種的繁育速度增加20倍以上，每年繁育300多萬株一代種苗。2013年新品種推廣種植面積達650畝以上。平均每畝產值在2萬元左右，增加社會經濟效益1000多萬元。由于質量好深受種植戶的喜愛，2年來專業合作社和農民育苗戶直接收入達80萬元以上。社會經濟效益顯著。

由于我們篩選出的三個品種具有果個大，產量高，抗性強，硬度大，架期長的特點。不僅適合在本省有推廣應用前景，也可在全國進一步示范推廣。而在推廣的過程中，由于草莓品種的取材繁育簡單易行，馴化成活率高，技術門檻和成本低，種植戶易學快懂；有關品種知識產權的認定與歸屬的問題就逐漸地顯現出來。而對品種進行快速有效的鑒定，是知識產權認定最基本的證據。因此，本項目組依據SSR分子標記技術檢測重現性高，穩定性好的特點，在前人對草莓進行的SSR標記研究工作的基礎上，從數十對SSR引物中篩查出3對本項目引進的3個草莓品種可以進行有效鑒別的引物，并建立快速的鑒定程序。為我們引進的三個草莓品種的鑒定和知識產權保護奠定了基礎。同時，擬首先對引物序列及鑒定過程申請專利保護。

發明內容

本發明提供了一種利用分子標記對3種草莓品種進行快速鑒別的方法。通過大量SSR引物的擴增反應，篩選出3個SSR位點的引物對，能夠在引進的新品種及若干個已在本區域推廣種植的舊品種之間形成顯著差異的電泳條帶，擴增結果可有效地用于鑒別草莓品種。

所述SSR位點指3個微衛星序列位點兩側的3對引物序列，所述引物的序列如下：A，上游：ACGAGGCCTTGTCTTCTTTGTA，下游：GCTCCAGCTTTATTGTCTTGCT；

B，上游：GCCTTGATGTCTCGTTGAGTAG，下游：TACCTTCTGCATTCACCATGAC ；

C，上游：CTTCACCTAATCACTTGCCTGA，下游GGTCTGTTCCTTTCCTTGTTTG；

所述的草莓品種為紫莓1號、紫莓3號和太空1號。

SSR引物對草莓品種進行鑒別的方法，所述方法包括下列步驟：草莓樣品中的總DNA的提取；PCR擴增；PCR產物電泳及染色，根據電泳結果判別草莓株系。