[發明專利]一種款冬花液相指紋圖譜的構建方法和應用

有效

• 申請號: 201710590009.6
• 申請日: 2017-07-19
• 公開（公告）號: CN107290456B
• 公開（公告）日: 2019-09-24
• 發明（設計）人: 李震宇;賈巖;邢婕;秦雪梅
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

本發明公開了一種款冬花HPLC指紋圖譜的構建方法和應用，涉及指紋圖譜的構建技術領域。本發明液相指紋圖譜的構建方法包括如下步驟：(1)款冬花經甲醇提取后過濾膜得測試溶液；(2)經高壓液相色譜儀檢測得化學指紋圖譜；(3)經圖譜分析確定款冬花液相指紋圖譜中包含14個特征峰。本發明樣本前處理簡潔、方便、重現性好，且能準確反映款冬花藥材的整體質量特征，用于款冬花藥材的質量控制。

技術領域

本發明涉及柱色譜法，特別涉及一種款冬花液相指紋圖譜的構建方法及其在質量檢測中的應用。

背景技術

款冬花為我國傳統中藥材，具有潤肺下氣，止咳化痰的功效，含有苯丙素類、萜類、黃酮類、甾體類、生物堿、揮發油等成分。現行的《中國藥典》對款冬花質量控制方法較為簡單，僅以款冬酮含量作為藥材質量評價的單一指標，而單一指標的測定難以真正從整體上反映藥材質量。

指紋圖譜技術作為一種多組分化學成分樣品的有效質量控制方法，能夠從整體上反映出待測樣品的整體性、特征性，目前被廣泛應用于中草藥的質量控制。王福剛等(蜜炙款冬花HPLC指紋圖譜研究，中藥材,第35卷第1期,2012)對蜜炙款冬花指紋圖譜進行了研究，共確定13個共有峰，但僅指認了蘆丁；楊秀偉等(款冬花藥材的HPLC化學成分指紋圖譜研究，藥學學報,第44卷第5期,2009)建立了款冬花藥材的化學成分指紋圖譜，確定25個共有峰，但是所指認的16個特征峰中酚酸類成分較少，而這類成分與款冬花止咳祛痰作用密切相關。所以，為了準確評價款冬花藥材質量，需要建立一種能全面反映包括酚酸類成分在內的指紋圖譜。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術存在的問題，提供一種能全面反映酚酸類成分的款冬花液相指紋圖譜的構建方法及其在質量檢測方面的應用。

本發明的目的通過如下技術方案實現：

一種款冬花液相指紋圖譜的構建方法，包括如下步驟：

(1)測試溶液的制備：取款冬花粉末0.8-1.2g，加入75％甲醇20-25mL，超聲提取0.5-1h，以75％甲醇補足損失重量，溶液過0.22μm微孔濾膜即可；

(2)吸取測試溶液至高效液相色譜儀測定，得到化學指紋圖譜；所述液相色譜條件：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；柱溫：25℃-35℃；進樣量：1-20μL；流速：0.8-1.2mL/min；紫外檢測波長：0-42min以240-326nm檢測；42-80min以210-230nm檢測；流動相：A相為0.01％-0.1％甲酸乙腈，B相為0.01％-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脫，每1次進樣完成后，系統平衡5min后再次進樣。

所述步驟(1)中取款冬花粉末1.0g，加入75％甲醇為20mL，超聲提取時間為1h。

所述步驟(2)中液相色譜條件為：柱溫：25℃；進樣量：10μL；流速：1mL/min；流動相：A相：0.03％甲酸乙腈，B相：0.03％甲酸水溶液。

所述步驟(2)中檢測波長：254nm/220nm切換檢測；所述指紋圖譜有14個特征峰，以12號峰為參照峰，相對保留時間：

1號峰：0.22±0.07；2號峰：0.26±0.03；3號峰：0.27±0.10；4號峰：0.41±0.01；5號峰：0.44±0.02；6號峰：0.48±0.16；7號峰：0.50±0.08；8號峰：0.53±0.10；9號峰：0.73±0.03；10號峰：0.74±0.17；11號峰：0.78±0.01；13號峰：1.23±0.13；14號峰：1.40±0.09。

所選的14個特征峰所對應的化合物分別是：