[發(fā)明專利]分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株、抗AMH單克隆抗體及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710585822.4
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107523552B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘劍用;陳浙;李因來;周旭一
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州博茵生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/26;G01N33/74;G01N33/577
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及抗AMH單克隆抗體。本發(fā)明還涉及抗AMH單克隆抗體的應(yīng)用。所述分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株為兩株，且保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC No.13849和CGMCC No.13850。這兩株細(xì)胞株能穩(wěn)定高效分泌特異性強(qiáng)的抗AMH單克隆抗體，將其進(jìn)行配對，建立了DAS?ELISA方法。該方法檢驗(yàn)血清樣本時(shí)，特異性好，靈敏度高，可達(dá)到0.1 ng/ml，可應(yīng)用于體外診斷的多個(gè)分支領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及抗AMH單克隆抗體。本發(fā)明還涉及抗AMH單克隆抗體的應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗穆勒氏管激素(anti-Mullerian hormone，AMH)是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族的成員之一，由Professor Alfred Jost于1974年首先發(fā)現(xiàn)。AMH是由兩個(gè)相同的70KD亞基，通過二硫鍵連接組成的二聚糖蛋白，相對分子質(zhì)量為140KD；人類AMH編碼基因位于19號染色體短臂，大小2.4～2.8 kb，含有5個(gè)外顯子。

抗穆勒氏管激素(AMH)在性腺器官發(fā)育過程中起著重要作用，是男女性腺功能的重要標(biāo)記物之一。在男性AMH主要由睪丸間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，始于胚胎形成并貫穿生命始終；在男性胎兒的發(fā)育過程中，AMH導(dǎo)致穆勒氏管退化，形成正常發(fā)育的男性生殖管道。在女性AMH主要由卵巢顆粒細(xì)胞產(chǎn)生，血清AMH保持相對于男性較低的一個(gè)水平，從青春期開始，血清AMH水平隨時(shí)間慢慢降低，并在更年期降低到ELISA法檢測不到的水平。

AMH的正常值界于2-6.8 ng/ml之間，AMH數(shù)值越高，代表卵子存量越豐沛，適合受孕的黃金期較長，AMH值越低則卵巢功能越差，35歲過后AMH值會開始急劇下降，當(dāng)AMH值低于0.7ng/ml時(shí)，表示卵子庫存量已嚴(yán)重不足，幾乎難以受孕。若AMH值大于6.8時(shí)，可考慮有多囊性卵巢癥候群的體質(zhì)，使用排卵針劑、藥物時(shí)，卵巢也容易對反應(yīng)過度而排出過多的卵子，造成卵巢過度刺激癥候群。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明第一個(gè)目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

為此，本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，所述分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株為兩株，分別命名為AMH-1和AMH-2，且保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC No.13849和CGMCC No.13850。

為了取得進(jìn)一步的技術(shù)效果，本發(fā)明還可以采用以下進(jìn)一步的技術(shù)方案：

優(yōu)選地，所述分泌抗AMH單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株由免疫小鼠的脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合得到，細(xì)胞融合后加入飼養(yǎng)層細(xì)胞。

優(yōu)選地，所述飼養(yǎng)層細(xì)胞為小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠胸腺細(xì)胞。

本發(fā)明第二個(gè)目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種抗AMH單克隆抗體。

為此，本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種抗AMH單克隆抗體，所述抗AMH單克隆抗體由前面所述的保藏編號為：CGMCCNo.13849和CGMCC No.13850的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生，且分別命名為：單克隆抗體AMH-1和單克隆抗體AMH-2。

本發(fā)明的第三個(gè)目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種天然血清檢測方法。

為此，本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：