[發明專利]一種用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合

在審

• 申請號: 201710583842.8
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107267630A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 賀建寧;王春亮;柳楠;劉積鳳
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合，其特征在于，所述用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合包括綿羊EphrinA3基因的特異性引物和GAPDH基因的特異性引物；所述綿羊EphrinA3基因的特異性引物的核苷酸序列為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；所述GAPDH基因的特異性引物的核苷酸序列分別為SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。

2.一種如權利要求1所述用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合的構建方法，其特征在于，所述用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合的構建方法包括：

皮膚組織總RNA的提取及cDNA的合成：利用Trizol法提取皮膚組織總RNA，并經檢測合格后用于cDNA的合成；cDNA第一鏈的合成，按照羅氏反轉錄試劑盒的說明書進行；

實時熒光定量PCR的反應體系：每個樣品設置三個重復，以GAPDH為內參基因；采用2^-△△Ct法計算相關基因的表達量；

實時熒光定量PCR反應程序。

3.如權利要求2所述的用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合的構建方法，其特征在于，2^-△△Ct法計算相關基因的表達量，具體包括：首先△Ct＝目的基因平均Ct值-內參基因平均Ct值；

其次，-△△Ct＝實驗組△Ct-對照組△Ct；

最后計算目的基因相對于內參基因的表達量2^-△△Ct。

4.如權利要求2所述的用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合的構建方法，其特征在于，所述按照羅氏反轉錄試劑盒的說明書進行，具體包括：采用羅氏的SYBR@Premix EX Taq TMⅡ(2×)，采用20μL反應體系；熒光定量PCR儀采用Roche Light Cycler 480Ⅱ。

5.如權利要求2所述的用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合的構建方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR反應程序，包括：

94℃預變性10min，

94℃變性30s，

60℃退火30s，

72℃延伸40s，運行40個循環。

6.如權利要求5所述的用于檢測細毛羊皮膚毛囊基因表達的特異性引物組合的構建方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR反應程序運行結束后進行融解曲線分析，根據溶解曲線峰的單一性來檢測引物擴增的特異性。